猪瘟病毒荧光定量检测试剂盒——探针法 用于定性检测猪血液、唾液、鼻腔分泌物、粪便等样本中的猪病病毒,该猪病以发热、皮肤发绀、淋巴结,肾,胃肠粘膜明显出血为特征,病情短,死亡率高。
本试剂盒利用实时荧光PCR检测技术,以猪病病毒基因组中的高度保守序列为靶区域,设计特异性引物和TaqMan荧光探针,通过PCR扩增实现对猪病病毒核酸的快速检测。
【主要组成成分】
1. 试剂盒包装组成
序号
组成
规格
用量/个反应
1
2XAvantFast Probe mix
1支,625μl/支
12.5μL
2
引物探针
1支,375μl/支
7.5μl
3
阳性对照
1支,250μl/支
4
阴性对照
【检验方法】
一、 使用前准备:
1. 试剂盒中各组分充分解冻并混匀。
2. 核酸提取尤其是针对RNA时采用冷冻高速离心机,操作前请将温度设定在4℃预冷。
3. 推荐使用进口离心管和带滤芯移液器头进行操作,检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。
二、 核酸提取(在样本处理区进行):
1. 按照试剂说明书操作
三、 PCR扩增检测:
1. 配液(在试剂准备区进行):取出扩增反应液,室温融化后充分混匀,短暂离心,并按反应个数分别取反应液和酶按照以下配比配制反应液:(注意应考虑有阳性对照和阴性对照甚至空白对照)
试剂
用量(反应个数为n)
12.5μl×n
7.5μl×n
反应液配制时应充分混匀,短暂离心,按20μl/管分装到PCR反应管中,转移至样本处理区;
2. 加样(在样本处理区进行):分别加入5μl步骤二中处理好的样本、阴性对照、阳性对照,盖好管盖,转移至核酸扩增区;
3. PCR扩增检测(在核酸扩增区进行):
将反应管置于全自动荧光定量PCR仪样品槽中,荧光通道选Hex,设置扩增反应条件为:
阶段
*如果使用ABI系列荧光PCR仪,设置扩增体积为25μl,同时要选择passive reference和quencher为none的模式。
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