项目
Western Blot实验
实验原理
该技术是根据抗原抗体的特异性结合原理来检测复杂样品中的某种蛋白质。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白,经转膜、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的第二抗体起反应,经过底物显色,分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况
应用
·广泛应用于蛋白表达水平检测
·鉴定某种蛋白质,也可以对目标蛋白进行定量和半定量的分析
·可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析
优点
·所需要的设备方便,成本低,使用灵活
·操作简单,结果一般比较稳定,而且阳性结果一般较为可靠
·结果分析与质谱相比较为容易
Western Blot实验主要流程:
目前,Western Blot因其便捷的优点,加之电泳及电转设备、抗体和信号检测系统的成熟商品化,多种技术不断进步共同提高了检测的灵敏度,使得Western blot技术成为几乎每一个进行蛋白质研究的实验室至关重要的实验之一。在一般的实验室中都能够进行Western blot技术操作,但在实验过程中也会经常遇到各种问题。
Western Blot实验中经常出现的问题及对策:
实验问题
可能原因
推荐办法
目的条带未显现
目的蛋白的表达量过低
提高上样量,浓缩目的蛋白,采用更高灵敏度的试剂盒
使用抗体效价不足
使用新配制的一抗,避免反复冻融;增加一抗或者二抗浓度,适当延长孵育时间
转膜效率低
选择合适的转膜方式,提高转膜效率
非平行、弯曲条带
电泳迁移速度过快或迁移温度过高
调整电泳设置如PH值、电压等,电泳时降低环境温度。
背景过高
封闭条件不合适
延长封闭时间或更换封闭剂
抗体浓度过高
降低一抗/二抗浓度并延长孵育时间
抗体与封闭剂发生交叉反应
加温和去污剂如Tween20。
我们的服务优势:
--针对不同的蛋白样品,艾普蒂生物采用不同的蛋白浓度测定方法(Lowry法或BCA法)
--保证实验的质量,严格的QC质控:利用内参准确定量,同一样品,蛋白浓度定量值多次实验间差异小于8%
--不同人员之间可重复性:保证结果的准确性
--完整的技术服务,我们能够提供从基因合成,细胞转染,载体构建,蛋白表达及纯化,蛋白功能研究等技术服务
--多年的抗体研究经验,对抗体选择具有丰富的知识储备,能从根源上避免假阳性结果
更多技术服务:
项目名称服务
SPF级Wistar大鼠服务
SPF级SD大鼠服务
SPF级BalBc小鼠服务
SPF级C57小鼠服务
昆明小鼠服务
SPF级ICR小鼠服务
大小鼠普通笼具及运输费服务
SCID小鼠服务
NPG小鼠服务
SPF级裸鼠服务
裸鼠特殊笼具及运输费服务
新西兰家兔(普通级1.5-2kg)服务
新西兰家兔(普通级2-2.5kg)服务
新西兰家兔(普通级2.5-3kg)服务
豚鼠(普通级)服务
动物相关(饲养)服务
普通环境大鼠饲养费服务
普通环境小鼠饲养费服务
普通环境大鼠饲养费(按笼位数收费)服务
普通环境小鼠饲养费(按笼位数收费)服务
屏障环境大鼠饲养费服务
屏障环境小鼠饲养费服务
屏障环境大鼠饲养费(糖尿病)服务
屏障环境小鼠饲养费(糖尿病)服务
屏障环境大鼠饲养费(按笼位数收费)服务
屏障环境小鼠饲养费(按笼位数收费)服务
IVC笼位大鼠饲养费服务
IVC笼位小鼠饲养费服务
裸鼠饲养费(IVC笼位)服务
裸鼠IVC单笼饲养费用服务
普通环境家兔饲养费服务
普通环境豚鼠饲养费服务
饲料辐照费服务
大小鼠打耳标服务
实验室服装消毒及使用费服务
动物相关检测(操作动作)服务
体外瘤内注射服务
大鼠灌胃给药服务
小鼠灌胃给药服务
兔子灌胃给药服务
大/小鼠注射药物/细胞等费用(腹腔注射/皮下注射/滴鼻/涂抹给药/)服务
气管滴注服务
膏药敷贴给药服务
雾化给药服务
灌肠费用服务
大鼠尾静脉注射服务
湖北艾普蒂生物工程有限公司
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