标本要求:石蜡/冰冻切片
在同一组织细胞标本上需要同时检测两种抗原 时,需进行双重荧光染色。双重免疫荧光标记法(double immunofluorescence labeling method)也分为直接法和间接法。
(1)直接法双重免疫荧光标记:将标记有两种不同荧光素的抗体(如抗A和抗B)以适当比例混合,滴加在标本上孵育,然后洗去未结合的荧光抗体,在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察,即可对两种抗原 进行定位和定量。直接法简便可靠,但灵敏度较低。
(2)间接法双重免疫荧光标记:用未标记的两种特异性抗体孵育组织或细胞,洗去多余的抗体后,再用两种不同的荧光素分别标记的第二抗体孵育组织或细胞,洗去多余的第二抗体,后在荧光显微镜下分别选择两种相应的激发滤片观察,从而对两种抗原 进行定位和定量。使用此法应注意两种特异性抗体必须来源于不同种属,且荧光标记第二抗体的种属必须与抗体的种属相匹配。
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