Dorsomorphin dihydrochloride,1219168-18-9

InChI

InChI=1S/C24H25N5O.2ClH/c1-2-12-28(13-3-1)14-15-30-22-6-4-19(5-7-22)21-16-26-24-23(17-27-29(24)18-21)20-8-10-25-11-9-20;;/h4-11,16-18H,1-3,12-15H2;2*1H

储存条件

Powder : 2-8℃, 2 years; In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months

描述

Dorsomorphin Dihydrochloride是一种有效,选择性和 ATP 竞争性的 AMPK 抑制剂。(Dorsomorphin Dihydrochloride is a potent, selective and ATP-competitive AMPK inhibitor.)

分子式

C₂₄H₂₅N₅O·2HCl

生物活性

Dorsomorphin dihydrochloride是一种有效，选择性和 ATP 竞争性的 AMPK 抑制剂，Ki 为109±16 nM。[1-4]

SMILES

[H]Cl.[H]Cl.C12=C(C3=CC=NC=C3)C=NN1C=C(C4=CC=C(OCCN5CCCCC5)C=C4)C=N2

动物实验

小鼠[3]在标准饮食中饲养的12周龄C57BL / 6小鼠通过尾静脉注射0.2g / kg葡聚糖或0.2g / kg铁 - 葡聚糖USP。葡聚糖仅注射载体, 而铁 - 葡聚糖注射载体或Dorsomorphin (10mg / kg) 。注射后1小时, 杀死小鼠并将肝脏片段收集在500μLSDS-裂解缓冲液中并机械均化。通过SDS-PAGE分离20μL肝脏提取物并进行免疫印迹。使用来自机械均质化的小鼠肝脏的Trizol收获总RNA (注射后6小时, 单次腹膜内剂量的Dorsomorphin (10mg / kg) 或DMSO) 。

细胞实验

在存在或不存在10mM 2DG或1μg/ mL衣霉素作为应激源的情况下, 用不同浓度的Dorsomorphin (0, 0.3, 1, 3, 10μM) , Versipelostatin和苯乙双胍处理HeLa和786-O细胞。 h在96孔板中。对于组合研究, 在存在或不存在10mM 2DG的情况下, 用各种浓度的UPR抑制剂处理786-O细胞24小时。然后用新鲜生长培养基替换培养基, 并将细胞再培养15小时。随后, 将MTT添加到培养基中, 并确定每个孔的吸光度。对于在葡萄糖戒断条件下的活力测定, 在存在或不存在葡萄糖的情况下, 在12孔板中用不同浓度的Dorsomorphin和苯乙双胍处理HT1080细胞18小时, 接种在96孔板中的生长培养基中, 然后培养。再添加MTT前48小时。通过将来自未处理细胞的每个对照吸光度设定为100％来计算相对细胞存活率 (一式四份测定的平均值±SD) 。使用等效线法[2]分析药物组合在产生80％细胞生长抑制 (IC80) 的浓度下的作用。

激酶实验

将HT1080细胞接种在24孔板 (每孔2×10 4个细胞) 中, 并在存在或不存在葡萄糖或10mM 2DG的情况下用Dorsomorphin处理2小时。通过在6孔板中转染质粒DNA (pAMPKα1-wt, pAMPKα1-D168A和pcFlag作为对照) , 在24孔板中接种并用UPR抑制剂处理来制备过表达野生型和显性失活AMPKα1的HT1080细胞。用细胞裂解缓冲液 (20mM Tris-HCl, pH 7.5, 250mM NaCl, 10％甘油, 0.5％NP-40, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 0.2mM PMSF, 1μg/ mL胃蛋白酶抑制剂, 0.5) 裂解细胞。 μg/ mL亮抑酶肽, 5mM NaF, 2mM Na 3 Vo4, 2mMβ-甘油磷酸盐, 1mM DTT) 。使用CycLex AMPK激酶测定试剂盒[2]测定对照样品 (在正常生长条件下的载体或pcFlag) 的相对AMPK激酶活性 (重复测定的平均值±SD) 。

In Vivo

在24小时内施用Dorsomorphin导致总血清铁浓度增加60％。因此, Dorsomorphin治疗可有效降低成人小鼠铁调素表达的基础水平并增加血清铁浓度[3]。

In Vitro

在2DG应力下, 用10μMDorsomorphin处理HT1080细胞2小时。免疫印迹分析显示, 通过将HT1080细胞暴露于2DG, AMPK的催化α亚基的磷酸化水平增加, 而当添加Dorsomorphin时, 基础和2DG诱导的磷酸化水平明显降低。使用基于ELISA的测定系统测量细胞激酶活性证实, 无论细胞培养条件如何, Dorsomorphin都会降低内源性AMPK活性[2]。

Note

以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

数据来源文献

[1]. Zhou G, et al. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action. J Clin Invest. 2001 Oct; 108 (8) :1167-74. [2]. Saito S, et al. Compound C prevents the unfolded protein response during glucose deprivation through a mechanism independent of AMPK and BMP signaling. PLoS One. 2012; 7 (9) :e45845. [3]. Yu PB, et al. Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism. Nat Chem Biol. 2008 Jan; 4 (1) :33-41. [4]. Zhang DY, et al. Role of autophagy and its molecular mechanisms in mice intestinal tract after severe burn. J Trauma Acute Care Surg. 2017 Oct; 83 (4) :716-724