枸橼酸托法替尼Tofacitinib citrate是 JAK1/2/3 抑制剂主打

描述：Tofacitinib citrate是 JAK1/2/3 抑制剂，IC50 分别为1，20 和 112 nM。

相关类别：

靶点：

JAK3:1 nM (IC50)

JAK2:20 nM (IC50)

JAK1:112 nM (IC50)

Rock-II:3400 nM (IC50)

Lck:3870 nM (IC50)

体外研究：Tofacitinib（CP-690550）柠檬酸盐可能在JAK3和JAK2处结合为2.2nM和5nM（Kd）。该报告包括在Camk1（Kd为5,000 nM），DCamkL3（Kd为4.5 nM），Mst2（Kd为4,300 nM），Pkn1（Kd为200 nM），Rps6ka2（Kin.Dom.2-C-）的Tofacitinib的额外结合。末端）（Kd为1,400 nM），Rps6ka6（Kin.Dom.2-C-末端）（Kd为1,200 nM），Snark（Kd为420 nM），Tnk1（Kd为640 nM）和Tyk2（Kd为620 nM） ）[1]。将K562，KCL22和THP-1细胞暴露于不同剂量的伊马替尼（IMA）或JAK抑制剂72小时以量化酪氨酸激酶抑制剂（TKI）活性的作用。然后使用MTT测定评估细胞生长抑制。 IMA以浓度依赖性方式抑制K562和KCL22细胞而非THP-1细胞的增殖。 K562的IMA的IC50值为0.28μM，KCL22的IC50值为0.17μM。尽管单独用托法替尼（TOF）或Ruxolitinib（RUX）治疗不能抑制细胞增殖，但Tofacitinib和Ruxolitinib均使K562和KCL22对IMA更敏感。

体内研究：与PEG处理的对照小鼠相比，用Tofacitinib处理的动物显示出显着更低的抗药物抗体（ADA）产生（初次免疫后5周，p<0.01，n = 8）。此外，ADA在第28天最早可检测到。与第21天至第35天相比，SS1P的滴度相差1000至200倍。与SS1P相比，注射了匙孔血蓝蛋白（KLH）的小鼠产生更快的抗体反应。然而，与对照相比，Tofacitinib的施用降低了抗KLH滴度（第21天p <0.05，第28天p <0.01，n 6.2="" mg="">4小时的血浆暴露。

激酶实验：通过与专有标签融合的所选激酶的竞争结合测定记录激酶活性。在存在和不存在测试化合物（例如，托法替尼）的情况下，激酶量与固定的活性位点定向配体结合的测量提供了对配体结合的DMSO对照的％。选择0到10之间的活动用于Kd测定。树形图表示由名为PhyloChem [1]的内部可视化工具生成。

细胞实验：使用MTT进行细胞存活测定。简而言之，将K562，KCL22和THP-1细胞（1×10 5个细胞/孔）接种到96孔微孔板上，并用或不用IMA（0.06-1.0μM）和/或托法替尼（10-1,000nM）或RUX处理。 （10-1,000nM）在37℃，湿润的5％（v / v）CO 2气氛中72小时。然后将培养基（200μL）与10μL的5mg / ml MTT溶液在37℃下孵育4小时。在352g离心5分钟后，除去培养基，向各孔中加入100μLDMSO以溶解甲..使用酶标仪在570nm处测量吸光度。结果表示为百分比。

动物实验：小鼠[2]使用雌性BALB / c小鼠（6-8周龄）。小鼠通过渗透泵输注（0.25μL/小时，28天）接受PEG300（100mg / mL）或单独载体（PEG300）中的Tofacitinib。免疫前4天，将小鼠麻醉并将其背部表面剃毛。在背部做一厘米的切口以形成皮下袋并插入泵。切口部位用伤口夹闭合。从第0天开始每周（ip）注射小鼠SS1P重组免疫毒素（RIT;5μg/小鼠）;对照小鼠仅接受盐水注射。在SS1P或载体免疫前每周，抽取50μL血液以获得血清样品。将血清储存在-80℃直至分析。大鼠[3]在雌性Lewis大鼠中诱导佐剂诱导的关节炎（AIA）。根据后爪体积随机分配大鼠并将其分配给Tofacitinib或载体治疗方案。每个治疗组7-8只大鼠组和正常幼稚大鼠（每组n = 4）在开始治疗后4小时，4天或7天安乐死（分别在免疫后第16,20和23天） 。每天一次口服给予载体或托法替尼（6.2mg / kg），在免疫后第16天开始并持续至第23天。在治疗开始后第4天和第7天（分别在免疫后第20天和第23天）重新评估爪体积。 ）。对于微型计算机断层扫描（微CT）成像，以及爪组织中的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，在单独的Lewis大鼠队列中诱导AIA。