GeL & PCR Purification Kit

产品编号：QR1017

制品内容

产品简介

本产品 GeL & PCR Purification Kit 既适用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收DNA 片段，也可用于 P°CR 产物或酶切产物中 DNA 片段的纯化，能够有效去除蛋白质、有机化合物、无机盐离子及寡核昔酸引物等杂质。该试剂盒适用于 100 bp~30 kb 大小DNA片段的回收，回收率高达 80% 以上，每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA 量约为 10 g,洗脱体积不低于 30 μL。该试剂盒纯化回收的 DNA 纯度高，完整性好，下游可用于酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

保存： 室温保存

使用方法

琼脂糖凝胶回收

(1). 使用前请先确认 Buffer PW 中已经加入相应体积的无水乙醇

(2). 将目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下 (尽量切除多余凝胶)，放入干净的离心管(自备)中，称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量并扣除)。注意：较大的胶块可以切碎，以保证溶胶效果。

(3). 向凝胶中加入 3 倍体积的溶胶液 Buffer PN (凝胶体积的计算方法举例：若凝胶的重量为 100 mg，其体积可视为 100 μL（以此类推）;置于65 ℃温育，期间每隔2~3 min 温和地上下颠倒离心管，以确保胶块完全溶解。

(4). 待上述溶胶液温度降至室温后再加入到吸附柱中，室温放置 2 min，12000 rpm 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

注意 1: 当回收片段< 500 bp 时，溶胶液转移到吸附柱前需要先加入 1 倍胶体积的异丙醇，上下颠倒混匀。

注意 2: 吸附柱的容积为 800 μL，若体积大于 800 μL 可分批加入。

(5). 向吸附柱中加入600 μL漂洗液 Buffer PW (确认已经加入无水乙醇) ，12000 rpm 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。注意:如果回收的 DNA 下游是用于盐感的实验（例如: 平末端连接或直接测序）建议加入漂洗液后静置 2~5 min 再离心。

(6). 重复步骤（5）。

(7). 将吸附柱放入收集管中，12000 rpm 离心1 min 去除残留的漂洗液，将吸附柱室温放置2~5 min，保证乙醇彻底挥发。

注意: 漂洗液中残留的乙醇会影响后续的酶反应实验。

(8). 将吸附柱放到新的 1.5 mL 离心管中，向吸附膜中间悬空加入 30~50 μL 洗脱液 Buffer EB，室温放置 2 min，12000 rpm 离心1 min。收集到的即为 DNA 溶液，可立即使用或置于 -20°°C保存。

注意 1: 洗脱液 EB 的体积不应少于 30 μL，体积过少会影响回收的效率。

注意 2: 将洗脱液 EB 加热至 65°C再洗脱，可明显提高回收效率。

PCR 产物或酶切产物回收

（1） 使用前请先确认 Buffer PW 中已经加入相应体积的无水乙醇

（2） 根据 P°CR 反应液或酶切反应液体积，向其中加入3 倍体积的 Buffer PN，充分混匀。

（3） 将上述溶液加入到吸附柱中，室温放置 2 min，12000 rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

注意 1: 当回收片段< 500 bp 时,上述溶液转移到吸附柱前需要先加入1倍样品体积的异丙醇,上下颠倒混匀。

注意 2: 吸附柱的容积为 800 μL，若体积大于 800 pL 可分批加入。

（4） 向吸附柱中加入 600 μL 漂洗液 Buffer Pw (确认已经加入无水乙醇) ，12000 rpm 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。个注:如果回收的 DNA 下游是用于盐敏感的实验(例如: 平末端连接或直接测序) ，建议加入漂洗液后静置 2~5 min 再离心。