产品名称：人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP
传代方法 | 次建议1:2传代 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
细胞描述 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 |
人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP部分相关细胞如下：
YS1001 A172 人胶质母细胞瘤细胞A172
YS1002 A204 人胚胎横纹肌肉瘤细胞A204
YS1003 A2058 人类转移性黑色素瘤A2058
YS1004 A2780 人卵巢癌细胞A2780
YS1005 A2780/GFP 人卵巢癌细胞A2780/GFP
YS1006 A3 人T淋巴细胞白血病细胞A3
YS1007 A375 人恶性黑色素瘤细胞A375
YS1008 A375E/GFP 人恶性黑色素瘤细胞A375E/GFP
YS1009 A431 人表皮癌细胞/鳞癌A431
YS1010 A498 人肾癌细胞A498
YS1011 A549 人非小细胞肺癌细胞A549
YS1012 A549/GFP/LUC 人非小细胞肺癌细胞A549/GFP/LUC
YS1013 A549/LUC 人非小细胞肺癌细胞A549/LUC
YS1014 A549/RFP 人非小细胞肺癌细胞A549/RFP
YS1015 A673 人骨尤文肉瘤细胞A673
YS1016 A875 人黑色素瘤细胞A875
YS1017 AC16 人心肌细胞AC16
YS1018 ACHN 人肾细胞腺癌细胞ACHN
YS1019 AGS 人胃腺癌细胞AGS
YS1020 AN3CA 人子宫内膜腺癌细胞AN3CA
YS1021 ARPE19 人视网膜色素上皮细胞ARPE19
YS1022 AsPC1 人转移胰腺腺癌细胞AsPC1
YS1023 AsPC1GEM 人转移胰腺腺癌细胞耐吉西他滨AsPC1GEM
YS1024 AV3 人宫颈癌细胞AV3
YS1025 ball1 人B细胞急性淋巴细胞白血病ball1
YS1026 BCPaP 人甲状腺癌细胞BCPaP
YS1027 beas2b 人肺支气管上皮（间皮）细胞beas2b
YS1028 Bel7402 人肝癌细胞Bel7402
YS1029 Bel7405 人肝癌细胞Bel7405
YS1030 BGC823 人胃癌细胞BGC823
YS1031 BIU87 人膀胱癌细胞BIU87
YS1032 BJ 人包皮成纤维细胞（有限细胞系）BJ
YS1033 BT474 人乳腺导管癌细胞（非三阴）BT474
YS1034 BT549 人乳腺导管癌细胞（三阴性）BT549
YS1035 BTB 人膀胱癌细胞BTB
YS1036 BxPC3 人原位胰腺腺癌细胞BxPC3
YS1037 C33A 人宫颈癌细胞C33A
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