产品名称：人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞DB
传代方法 | 次建议1:2传代 | 冻存条件 | 人脑髓母细胞瘤细胞DAOY 无血清冻存液（货号：C7001） |
细胞描述 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 |
人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞DB处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞DB培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞DB部分相关细胞如下：
YS1041 CAKI2 人肾透明细胞癌CAKI2
YS1042 CAL27 人舌鳞癌细胞CAL27
YS1043 Calu1 人肺癌细胞/鳞癌Calu1
YS1044 Calu3 人肺腺癌细胞Calu3
YS1045 calu6 人间变性肺腺癌细胞calu6
YS1046 CAOV3 人卵巢腺癌细胞CAOV3
YS1047 Capan1 人胰腺癌细胞Capan1
YS1048 Capan2 人胰腺癌细胞Capan2
YS1049 CaSKi 人宫颈癌细胞CaSKi
YS1050 CCD841CON 人正常结肠上皮细胞CCD841CON
YS1051 CCRFCEM 人急性淋巴细胞白血病细胞CCRFCEM
YS1052 CEMC1 人急性淋巴细胞白血病细胞CEMC1
YS1053 changliver 人宫颈癌细胞changliver
YS1054 CoC1 人卵巢癌细胞CoC1
YS1055 COLO205 人结肠癌细胞COLO205
YS1056 COLO320 人结直肠腺癌细胞COLO320
YS1057 COLO320DM 人结直肠腺癌细胞COLO320DM
YS1058 COLO320HSR 人结直肠腺癌细胞COLO320HSR
YS1059 CW2 人结肠癌细胞CW2
YS1060 CX1 人结肠癌细胞CX1
YS1061 D283Med 人脑髓母细胞瘤细胞D283Med
YS1062 D341Med 人脑髓母细胞瘤细胞D341Med
YS1063 DAMI 人巨核细胞白血病细胞DAMI
YS1064 DAOY 人脑髓母细胞瘤细胞DAOY
YS1065 DAUDI 人Burkitt's淋巴瘤细胞DAUDI
YS1066 DB 人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞DB
YS1067 Detroit562 人口腔咽头癌胸水转移细胞Detroit562
YS1068 DLD1 人结直肠腺癌细胞DLD1
YS1069 DMS53 人小细胞肺癌细胞DMS53
YS1070 DU145 人前列腺癌细胞DU145
YS1071 EAhy926 人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926
YS1072 Eca109 人食管癌细胞Eca109
YS1073 Ect1E6E7BSL1 人宫颈上皮/阴道上皮Ect1E6E7BSL1
YS1074 ECV304 人膀胱癌细胞人脐静脉内皮ECV304
YS1075 ECV304/RFP 人膀胱癌细胞+RFP人脐静脉内皮ECV304/RFP
YS1076 EJ1T24 人膀胱癌细胞EJ1T24
YS1077 ES2 人卵巢透明细胞癌细胞ES2
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