产品名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
传代方法 | 次建议1:2传代 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
细胞描述 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 |
人胰腺癌细胞HPAFⅡ收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
人胰腺癌细胞HPAFⅡ部分相关细胞如下：
YS1126 HFOB119 人SV40转染成骨细胞HFOB1.19
YS1127 HGC27 人胃癌细胞未分化癌HGC27
YS1128 HGC27YFP 人胃癌细胞黄色荧光标记HGC27YFP
YS1129 HK2 人肾皮质近曲小管上皮细胞HK2
YS1130 HKb20 人肾上皮细胞HKb20
YS1131 HL60 人早幼粒白血病细胞HL60
YS1132 HL7702 人肝细胞HL7702
YS1133 HMC3 人小胶质细胞HMC3
YS1134 HMEC1 人包皮微血管内皮细胞有限细胞系HMEC1
YS1135 HO8910PM 人高转移卵巢癌细胞HO8910PM
YS1136 HOS 人骨肉瘤细胞HOS
YS1137 HPAC 人胰腺癌细胞HPAC
YS1138 HPAFⅡ 人胰腺癌细胞HPAFⅡ
YS1139 HPASMC 人肺动脉平滑肌HPASMC
YS1140 hTERTHPNE 人胰腺导管细胞hTERTHPNE
YS1141 HS578T 人乳腺癌细胞（三阴性）HS578T
YS1142 HS683 人脑胶质瘤细胞HS683
YS1143 HS746t 人胃腺癌细胞HS746t
YS1144 HSFSV40T 人真皮成纤维细胞（SV40转染）（包皮，皮肤，眼睑皮都有）HSFSV40T
YS1145 HT1080 人纤维肉瘤细胞HT1080
YS1146 HT1376 人膀胱癌细胞HT1376
YS1147 HT29 人结肠癌细胞HT29
YS1148 HTMC 人眼小梁网细胞HTMC
YS1149 HuCCT1 人肝内胆管癌细胞HuCCT1
YS1150 huh6 人肝母细胞瘤细胞huh6
YS1151 huh7 人肝癌细胞huh7
YS1152 huh7(无突触) 人肝癌细胞huh7(无突触)
YS1153 huh7（有突触） 人肝癌细胞huh7（有突触）
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