中文名:快速内切酶NcoI
英文名:LightNing™ NcoI
货号:L397482
包装:1kit
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品组成
货号 |
组分 |
规格 |
L397482A-30μl |
LightNing™ NcoI |
30μl |
L397482B-1ml |
10×CutOne™ Buffer |
1ml |
L397482C-1ml |
10×CutOne™ Color Buffer |
1ml |
|
产品简介
LightNing™ 快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒 DNA、 PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LightNing™ 快速内切酶具有如下特点:5~15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 CutOne™ 酶切 Buffer 中具有 100% 活性,支持一管化反应,提升“酶切 - 修饰 - 连接” 的体验。
建议的反应条件
1× CutOne™ 缓冲液;
37℃温育;
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育 20 min。
质量控制
功能活性检测:最适反应温度下,在 20 μl 反应体系中,1 μl LightNing™ NcoI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
超长时间温育检测:最适反应温度下,将 1 μl LightNing™ NcoI 与 1 μg λDNA 共温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测:最适反应温度下,使用 1 μl LightNing™ NcoI 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测:使最适反应温度下,将 1 μl LightNing™ NcoI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。 蓝白斑检测:将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl LightNing™ NcoI 消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落, 而连接错误(即 DNA 末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对 于 LightNing™ 系列限制酶而言,白色菌落比例应小于 1%。
使用方法
1. DNA 快速酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× CutOne™ Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③ 37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA);
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切
① 每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
注:如果总反应体系大于 20 μl,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位点数量
甲基化修饰影响
在不同反应缓冲液中的活性
查看阿拉丁官网此产品相关对应页面:https://www.aladdin-e.com/zh_cn/L397482.html
关键字: 快速内切酶NcoI;LightNing? NcoI
上海阿拉丁生化科技股份有限公司是A股上市公司((股票代码:688179),专注于科研试剂的研发、生产和销售,已陆续建立多个工厂和研发中心。作为领军企业,阿拉丁始终坚持质量第一,连续13年被评为“最受欢迎试剂品牌”。
阿拉丁目前常备库存试剂产品品种超过7万种,SKU总数超过46万,产品线涵盖了化学试剂、生化试剂、药靶配体、蛋白质和抗体等多个领域,是国内少数化学试剂到生物试剂全面发展的国产试剂品牌,产品同步发布在我们国内外电商平台。