产品名称：小鼠子宫颈癌细胞（/GFP标记）U14/GFP
传代方法 | 次建议1:2传代 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
细胞描述 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 |
小鼠子宫颈癌细胞（/GFP标记）U14/GFP货后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
小鼠子宫颈癌细胞（/GFP标记）U14/GFP培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
小鼠子宫颈癌细胞（/GFP标记）U14/GFP相关细胞如下：
YS2085 OCIAML3 人急性骨髓性白血病细胞OCIAML3
YS2086 ARH77 人外周血淋巴细胞ARH77
YS2087 BC3 人胸膜积液B淋巴细胞BC3
YS2088 CFPAC1 人胰腺导管癌细胞CFPAC1
YS2089 KATOⅢ 人胃腺癌细胞KATOⅢ
YS2090 KHOS240S 人骨肉瘤细胞KHOS240S
YS2091 SJSA1 人骨肉瘤细胞SJSA1
YS2092 A9 小鼠结缔组织L细胞株A9
YS2093 BT 牛鼻甲骨细胞BT
YS2094 LNCaP 人前列腺癌细胞LNCaP
YS2095 HCCLM3 人肝癌细胞HCCLM3
YS2096 EAC 小鼠艾氏腹水癌细胞EAC
YS2097 Hifive(BTITn5B14) 昆虫细胞Hifive(BTITn5B14)
YS2098 SDM 昆虫细胞SDM
YS2099 BGE1L15B 昆虫细胞BGE1L15B
YS2100 JVM2 人外周淋巴细胞（EB病毒感染）JVM2
YS2101 2BS 人二倍体细胞/人胚肺成纤维细胞2BS
YS2102 CCRFSB 人外周血淋巴细胞CCRFSB
YS2103 M210B4 小鼠骨髓纤维原细胞M210B4
YS2104 NCIH441 人肺腺癌细胞NCIH441
YS2105 RBL1 大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL1
YS2106 U14/GFP 小鼠子宫颈癌细胞（/GFP标记）U14/GFP
YS2107 LTEPs 人肺鳞癌细胞LTEPs
YS2108 NCTCclone1469 小鼠正常肝细胞NCTCclone1469
YS2109 CRFK 猫肾细胞CRFK
YS2110 MCCAR 人外周血淋巴细胞MCCAR
YS2111 PLA801D95D 人肺巨细胞癌细胞PLA801D95D
YS2112 2B4 人前列腺癌细胞2B4
YS2113 PGBE1 人肺巨细胞癌高转移系PGBE1
YS2114 HeLa229 人宫颈癌细胞HeLa229
YS2115 hEM15A 人子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞细胞hEM15A
YS2116 BV173 人白血病细胞BV173
YS2117 SK6 猪肾细胞SK6
YS2118 RH30 人横纹肌肉瘤细胞RH30
YS2119 TCYIK 人宫颈小细胞癌细胞TCYIK
YS2120 Hs68 人男性正常龟头细胞Hs68
YS2121 MV3 人黑色素瘤细胞MV3
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