产品名称：人肺癌细胞/5/Fu耐药株A549-5/Fu
传代方法 | 次建议1:2传代 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
细胞描述 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 |
人肺癌细胞/5/Fu耐药株A549-5/Fu到货后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
人肺癌细胞/5/Fu耐药株A549-5/Fu培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
人肺癌细胞/5/Fu耐药株A549-5/Fu部分相关细胞如下：
YS1734 HDFSV40T 人皮肤成纤维细胞（国内建系处理）HDFSV40T
YS1735 MNNGHOSCl5 人骨肉瘤细胞MNNGHOSCl5
YS1736 TMK1 人胃腺癌细胞TMK1
YS1737 HRMVPCSSV40T 人视网膜周细胞HRMVPCSSV40T
YS1738 HRMECSV40T 人视网膜微血管内皮细胞HRMECSV40T
YS1739 HMrSV5 人腹膜间皮细胞HMrSV5
YS1740 HFLSRA 人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞HFLSRA
YS1741 NCIH889 人小细胞肺癌细胞NCIH889
YS1742 NCIH69 人非小细胞肺癌细胞NCIH69
YS1743 SUDHL1 人ALK阳性间变性大细胞淋巴瘤SUDHL1
YS1744 A427 人肺癌细胞A427
YS1745 GM12878 人B淋巴细胞GM12878
YS1746 BPH1 人前列腺增生细胞BPH1
YS1747 HLEB3 人正常眼睛晶状体上皮细胞美国ATCC断种HLEB3
YS1748 CAL33 人舌鳞癌细胞CAL33
YS1749 SUDHL16 人ALK阳性间变性大细胞淋巴瘤SUDHL16
YS1750 mdamb231/GFP/LUC 人乳腺癌细胞mdamb231/GFP/LUC
YS1751 mdamb468/GFP/LUC 人乳腺癌细胞mdamb468/GFP/LUC
YS1752 HBL1 人弥漫性大B细胞淋巴瘤HBL1
YS1753 HEK293T悬浮 人胚肾细胞HEK293T悬浮
YS1754 YT 人NK细胞白血病细胞YT
YS1755 94T778 人高分化脂肪肉瘤细胞94T778
YS1756 SNU5 人胃癌细胞SNU5
YS1757 GISTT1 人胃肠道间质瘤细胞GISTT1
YS1758 Mo7e 人巨细胞白血病细胞株Mo7e
YS1759 OCILY10 人B细胞淋巴瘤OCILY10
YS1760 G402 人B细胞淋巴瘤G402
YS1761 HPDE6C7 人正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6C7
YS1762 RDES 人尤文氏肉瘤RDES
YS1763 Z138 人套细胞淋巴瘤细胞Z138
YS1764 NCIH747 人盲肠癌细胞/结直肠癌NCIH747
YS1765 SNU620 人胃癌细胞SNU620
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