产品名称:人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记293T/GFP
传代方法 | 次建议1:2传代 | 冻存条件 | 无血清冻存液（货号：C7001） |
细胞描述 | 本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 |
培养备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养 |
人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记293T/GFP收到货后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基）
人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记293T/GFP培养步骤
一、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a）、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b）、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞冻存：（注：无血清冻存液冻存细胞的方法请参考我司官网货号：C7001）
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；
4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃
人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记293T/GFP部分产品：
YS3561 cjm CJM
YS3562 clonem3s91 CloneM-3(S91)
YS3563 cls54 CLS-54
YS3564 cmk115 CMK-11-5
YS3565 cmk86 CMK-86
YS3566 cocm1 CoCM-1
YS3567 colo206f COLO206F
YS3568 colo320dmf COLO320DMF
YS3569 colo668 COLO668
YS3570 colo679 COLO679
YS3571 colo684 COLO684
YS3572 colo741 COLO741
YS3573 colo792 COLO792
YS3574 colo60h COLO-60H
YS3575 colo94h COLO-94H
YS3576 corl105 COR-L105
YS3577 corl23cpr COR-L23/CPR
YS3578 corl23r COR-L23/R
YS3579 corl47 COR-L47
YS3580 corl88 COR-L88
YS3581 corl95 COR-L95
YS3582 cov504 COV504
YS3583 cov644 COV644
YS3584 ctb1 CTB-1
YS3585 delta47 Delta-47
YS3586 dms273 DMS273
YS3587 dms454 DMS454
YS3588 dv90 DV-90
YS3589 eb1 EB1
YS3590 eb2 EB2
YS3591 ecgi10 EC-GI-10
YS3592 f36p F-36P
YS3593 f4nmel F4N(MEL)
YS3594 f98egfr F98EGFR
YS3595 f98npegfrviii F98npEGFRvIII
YS3596 fak FAK++
YS3597 fao Fao
YS3598 fm3a FM3A
YS3599 /Furpnt2 /Fu-RPNT-2
YS3600 g292clonea141b1 G-292cloneA141B1
YS3601 ga10 GA-10
YS3602 gak GAK
YS3603 gb1 GB-1
YS3604 gi1 GI-1
YS3605 gm04281c GM04281C
YS3606 gm09197c GM09197C
YS3607 gm12580 GM12580
YS3608 gm12611 GM12611
YS3609 gm15850 GM15850
YS3610 gm2005 GM2005
YS3611 gm20942 GM20942
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