慢性肾病是一个日益严重的公共卫生问题,迫切需要新的药物。过氧化麦角甾醇(EP)是冬虫夏草蝉盛(C. cicadae)产生的主要甾醇,是一种广泛使用的中药。蝉已被用于治疗多种疾病,并具有潜在的肾脏保护益处。 本研究旨在探讨EP的抗纤维化作用及其潜在机制。方法与结果:通过转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激正常大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F)进行成纤维细胞活化,并应用EP处理,探索其潜在的抗纤维化作用。使用MTT分析研究细胞增殖。使用免疫组化和/或蛋白质印迹分析纤维化相关蛋白表达。EP治疗减弱了TGF-β1诱导的肾成纤维细胞增殖、细胞骨架蛋白和CTGF的表达以及ECM的产生。此外,EP 阻断 TGF-β1 刺激的 ERK1/2、p38 和 JNK 通路磷酸化。此外,TGF-β1诱导的纤连蛋白表达通过抑制MAPKs或EP处理而减弱。结论:总之,我们的研究结果表明,EP能够抑制TGF-β1诱导的NRK-49F成纤维细胞活化。这一新信息提供了一系列理论证据,支持使用蝉来干预肾脏疾病,并表明EP有可能被开发为预防肾纤维化的治疗剂。
脂肪酸合酶 (FAS) 是一种很有前途的抗真菌靶标,因为它在真菌细胞和哺乳动物细胞之间具有明显的结构差异。本研究的目的是评估科学文献中描述的 FAS 抑制剂(槲皮素、反式查尔酮、鞣花酸、木犀草素、高良姜素和染料木黄酮)对皮肤癣菌红毛癣菌的抗真菌活性及其对脂肪酸和麦角甾醇合成的影响。方法和结果:通过微量稀释法测定天然产物的抗真菌活性,测定最低抑菌浓度(MIC)。使用原生质体再生测定法评估化合物对细胞膜的影响。通过分光光度法定量麦角甾醇含量。通过酶法评估类黄酮对 FAS 的抑制作用,以确定 IC50 值。定量RT-PCR分别用于测量参与脂肪酸和麦角甾醇生物合成的FAS1和ERG6基因在红锥虫暴露于所测试的类黄酮过程中的转录水平。 黄酮类槲皮素和反式查尔酮对红锥虫有效,野生型菌株(MYA3108)的MIC分别为125和7.5 μg/mL,ABC转运蛋白突变株(ΔTruMDR2)的MIC分别为63和1.9 μg/mL。氟康唑和蔚蓝素对照组野生型菌株的MIC分别为63和125 μg/mL,突变型菌株分别为30和15 μg/mL。槲皮素和反式查耳酮也降低了两种菌株中的麦角甾醇含量,表明对脂肪酸和麦角甾醇合成的干扰导致了细胞膜破坏。槲皮素的MIC使再生原生质体数量减少了30.26%(野生型菌株)和91.66%(突变型菌株)。槲皮素的一半MIC(0.5 MIC)没有减少再生野生型真菌菌落的数量,但导致突变菌株原生质体数量减少36.19%。相比之下,反式查耳酮和蔚蓝素的MIC和0.5 MIC大大降低了两种菌株的原生质体再生。FAS1基因在槲皮素、反式查尔酮、氟康唑和蔚蓝素的MIC存在下被抑制。ERG6基因在氟康唑和蔚蓝素的MIC存在下被诱导,在反式查尔酮和槲皮素的MIC存在下被抑制。反式查尔酮和槲皮素对FAS的酶活性有抑制作用,IC50值分别为68.23和17.1 μg/mL。结论:反式查尔酮和槲皮素对红锥虫具有抗真菌活性,降低麦角甾醇水平,调节FAS1和ERG6的表达。
膜脂质麦角甾醇几乎只存在于真菌中,并且经常被环境微生物学家用作活真菌生物量的指标,基于麦角甾醇不稳定的假设,因此在真菌菌丝死亡后迅速降解。方法和结果:我们研究了没有活真菌的环境样品中麦角甾醇的降解。在本研究使用的条件下,麦角甾醇在作为纯化合物添加时以及与死真菌结合时都非常稳定。在2个月内,麦角甾醇的减少最多为34%,当避免阳光照射时。与无菌对照组相比,在这段时间内,天然细菌组合的存在并没有增强降解。然而,光化学降解是显着的,并导致麦角甾醇含量在24小时内降低43%。结论:这些结果表明,麦角甾醇应谨慎用作活真菌的生物标志物。
麦角甾醇是真菌膜的重要成分。唑类抑制麦角甾醇的生物合成,尽管其抗真菌活性的细胞基础尚不清楚。我们使用多种方法来证明液泡 H(+)-ATP 酶功能对麦角甾醇的关键需求,已知麦角甾醇对真菌毒力至关重要。方法和结果:酿酒酵母麦角甾醇生物合成突变体未能酸化液泡,并表现出多种vma(-)表型。从液泡膜中提取麦角甾醇也使 V-ATP 酶失活,而不会破坏其亚结构域的膜结合。在酿酒酵母和真菌病原体白色念珠菌中,氟康唑损害了液泡酸化,而伴随的麦角甾醇喂养恢复了 V-ATP 酶功能和细胞生长。此外,氟康唑加剧了抗菌剂胺碘酮引发的胞质 Ca(2+) 和 H(+) 激增,并损害了纯化液泡中的 Ca(2+) 封存。这些发现为在体外观察到的唑类药物和胺碘酮之间的协同作用提供了机制基础。此外,我们使用念珠菌病小鼠模型展示了这种协同作用在治疗全身性真菌感染方面的临床潜力。结论:总之,我们证明了真菌 V-ATP 酶功能中的新调节成分、麦角甾醇在液泡离子稳态中的新作用、真菌中唑类毒性的合理细胞机制,以及两种抗真菌剂之间协同作用的初步体内证据。对真菌中唑类毒性的细胞基础的新见解可能会拓宽全身性真菌感染患者群体的治疗方案。
麦角甾醇耗竭独立抑制酵母交配的两个方面:信息素信号传导和质膜融合。在信号转导中,麦角甾醇参与 Ste5 募集到质膜上的极化位点。麦角甾醇被认为通过与鞘脂的长酰基链相互作用在膜内形成微结构域。方法和结果:我们发现,尽管无鞘脂麦角甾醇集中在细胞间接触部位,但信息素信号在接触部位的传递取决于麦角甾醇与鞘脂的平衡比例。如果尽管信息素反应减弱,麦角甾醇耗尽的细胞之间仍形成交配对,则随后的膜融合过程会延迟。Prm1 也参与膜融合。然而,麦角甾醇和 Prm1 具有独立的功能,只有 prm1 突变交配对容易受到接触依赖性裂解的影响。与信号转导相比,质膜融合对鞘脂耗竭相对不敏感。结论:因此,麦角甾醇的无鞘脂池促进质膜融合。
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王玲