品名：Lightning-WB ™ 3小时超快WB试剂盒，货号：IF9999，品牌：Engibody订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校课题组青睐并长期采购的超快WB试剂盒！
3小时超快Western试剂盒Lightning-WB™ 试剂盒的五个巨大优势1、本试剂盒适用于细菌、真菌、贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织及植物组织。 2、本试剂盒适用于胞浆蛋白WB、膜蛋白WB、线粒体蛋白WB及核蛋白WB。 3、本试剂盒既适用于Flag/GFP等标签融合蛋白WB也适用于内源性蛋白WB。 4、本试剂盒检测目的蛋白的灵敏度极高，达到pg级，配合超灵敏ECL后可达fg级。 5、20分钟细胞样本裂解制备，30分钟预制胶超快电泳，20分钟超快转印，10分钟超快封闭，30分钟抗体超快孵育。闪电一般的速度。 6、独特配方试剂，无需购置专门仪器，常规电泳仪、转印仪即可无缝对接。
第一部分：试剂盒组分清单（共计17个组分）
第二部分：背景简介及应用场景 蛋白印迹WB Western blotting (WB)是在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定基础上发展起来的蛋白质检测技术，是将SDS-PAGE凝胶电泳分离的非标记蛋白质转移到固相载体（NC膜，PVDF膜），再用特异性抗体对目的蛋白质进行鉴定及定量的分析技术，其检测蛋白质的灵敏度为pg级，甚至可以达到fg级，该技术广泛应用于医学、生物学研究领域。 1、WB和ELISA，这两种最经典蛋白研究技术的区别是什么？1)、ELISA用于定量，WB用于定性，也可以通过灰度分析做到半定量。2)、WB的特异性比ELISA好。Western blotting 可以看到特异性的条带，但是无法精确的绝对定量。 ELISA可以直接读出浓度数值，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可靠。3)、可开展WB实验的靶标蛋白种类是远远超过ELISA的。ELISA检测蛋白一般采用双抗夹心法，市面上可以选择的所有ELISA试剂盒种类很有限，全球闻名的ELISA试剂盒金标准R&D公司经过几十年的开发，也仅仅是开发了几千种蛋白的ELISA kit。但是WB就不同了，只要能找到一抗，就可以开展WB实验，而一抗仅abcam一个公司就有十几万种。覆盖了科研中碰到的几乎所有靶蛋白。4)、由于两种方法各有优点，各有应用场景，不能全面相互代替。 2、WB方法除了单独使用外，还可以和哪些上游实验配合使用？ 1)、上游可以是CoIP免疫共沉淀实验，验证两个已知蛋白有无相互作用，细胞内蛋白互作，属于In Vivo体内互作。 2)、上游也可以是GST pull down实验，验证一个已知蛋白(GST融合表达蛋白)与其他蛋白有无相互作用，细胞外蛋白互作，属于In Vitro体外互作。GST Pull-down———GST 标签融合蛋白与猎物蛋白pull-down，In Vitro体外研究蛋白互作PPI的经典方法。将目的蛋白序列加上GST或His标签序列进行基因合成并构建重组质粒，转化大肠杆菌后表达纯化蛋白，再将GST 标签融合蛋白固定于GSH磁珠上作为诱饵蛋白，然后去拉取与之结合的猎物蛋白。 3)、在下列两种情况下GST Pull-down是不可替代和不可或缺的：A、诱饵蛋白找不到CoIP级的抗体，而GST Pull-down不需要CoIP级的免疫捕获抗体，正好克服了这个难题。B、目的蛋白所在的研究对象（比如真菌等）无法采用普通的标签质粒转染、转化的方法进行外源标签融合蛋白的过表达，也找不到内源蛋白的抗体，这时便无法实施CoIP实验，因此GST Pull-down就是这类情况下研究蛋白互作的唯一选择。 第三部分：技术原理和技术流程 技术原理： 蛋白质印迹法 (WB) 是一种广泛使用的基于抗体的技术，用于检测细胞或组织提取物中的蛋白质表达水平。这项技术借助抗体与目的蛋白的结合作用，测量生物样品中的蛋白质水平。 常规蛋白印迹实验步骤繁多且很耗时，为此，我们开发了独特配方的Quick-WB系列超快试剂，大大提高了实验速度，同时提供卓越的技术支持，以使您的蛋白印迹WB实验在一个下午即可获得成功。 技术流程： 步骤一：待测样本的准备（组织、细胞、血清、渗出液等），选择目的蛋白的经过WB验证的抗体。 步骤二：蛋白质样本制备，根据实验要求选择制备总蛋白、膜蛋白、胞浆蛋白或核蛋白。 步骤三：SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白，将分离的蛋白转移到固相支持载体（NC膜，PVDF膜）。 步骤四：目标蛋白的免疫学检测（抗体孵育，识别抗原），化学发光显影蛋白条带。 步骤五：蛋白条带的定量分析，软件工具（Image J等）测定灰度值。
第五部分：实验结果与示例展示
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