品名：Super-GST™ GST 蛋白纯化 Kit，货号：P0007，品牌：Engibody
订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
保姆级GST 蛋白纯化试剂盒
Super-GST™ GST 标签蛋白纯化试剂盒的优势
1、本试剂盒中包含特殊配方的雷霆细菌裂解液，可快速裂解大肠杆菌并完全释放可溶型GST标签蛋白及包涵体（无需超声破菌，无需加热，快速温和，完全裂解。盒内裂解液5-10分钟内即可高效裂菌并完全释放GST标签融合蛋白）。
2、本试剂盒可以通过温和的、非变性的洗脱条件得到目的蛋白。最大程度保留蛋白活性。
3、试剂盒中的GSH填料可以重复使用10次以上。
4、本试剂盒是一个Complete All-In-One Kit — 包含全部试剂，高效细菌裂解液、平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、洗脱剂、GSH填料、重力空柱（带控流阀）以及下游WB检测所需的高特异性GST小鼠单抗。
让GST蛋白纯化变得简单高效！
第一部分：背景简介及应用场景
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是一个由211个氨基酸组成的大小为26kDa序列，它是一种广泛使用的可提高靶蛋白的溶解度亲和标签。GST标签与固定化的谷胱甘肽GSH具有亲和力，常用于原核表达。它可以与一个蛋白的N端或C端融合。
谷胱甘肽亲和是一种有效的一步纯化GST(谷胱甘肽S-转移酶)标签蛋白的方法。GST可作为一种可溶性蛋白在大肠杆菌细胞质中大量表达，并具有完全的酶活性。此外，许多在大肠杆菌中表达时不溶的真核蛋白，在表达为GST标签蛋白时被证明至少部分可溶。
重组标签蛋白纯化利用谷胱甘肽GSH的结构能够和GST（谷胱甘肽S-转移酶）结合位点互补,谷胱甘肽偶联在琼脂糖介质上,带有GST的标签蛋白与琼脂糖介质上交联的谷胱甘肽配体互补性结合,这种可逆性的结合在温和、非变性的条件下通过参加还原型谷胱甘肽竞争性洗脱下来,杂质通过洗涤缓冲液被去除,从而纯化富集目的蛋白。
GST 标签纯化蛋白的优点
1）、GST标签蛋白能提高蛋白的溶解度，可把一些难溶蛋白变成可溶性蛋白，使实验变得具有可行性。
2）、GSH谷胱甘肽偶联磁珠亲和力强，洗脱纯度高，且是非变性、温和、竞争性洗脱，有利于保持蛋白活性。
3）、可用蛋白酶进行去除。
4）、适用范围广，可在不同宿主中高效表达。
5）、一般来说，使用一步纯化出的GST标签蛋白纯度高于一步纯化出的His标签蛋白纯度。
GST 标签纯化蛋白的缺点
1）、融合表达的GST标签，肽链较长，大到26kD，可能会改变目的蛋白的天然构象。
2）、仅能纯化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，则很难用变性的方法纯化。因为一旦将目的蛋白变性，则GST标签也会被变性，那么就会失去生物活性，也就无法结合GSH填料了。
第二部分：技术原理
无论是大肠杆菌或者其他宿主细胞中，天然表达的还是重组表达的，各种来源的GST标签蛋白，都可以用固定的谷胱甘肽亲和层析法纯化，然后用过量的还原性谷胱甘肽GSH竞争洗脱。使用以琼脂糖凝胶为基质的Glutathione Agarose Resin 6FF介质，可以在相对较高流速的情况下，实现对目的蛋白的纯化。此介质通过标签与配体结合，缓冲液洗脱去除杂质，然后标签蛋白在温和且非变性的条件下被洗脱，使得蛋白的抗原性能和功能活性得到保护。
GST标签的去除
如果GST标签需要切除，包含 PreScission 蛋白酶识别位点、Thrombin识别位点或Factor Xa识别位点的标签蛋白可以在与GSH填料柱结合时或在洗脱后进行标签去除。一般来说，柱上切割是推荐的方法，因为许多潜在的杂质都能被洗掉，目的蛋白洗脱时具有更高的纯度。如果切割条件需要优化，建议在洗脱后进行标签去除。
第三部分：技术流程
第四部分：实验结果与示例展示
图注如下：
GST-tagged protein purification from whole cell extracts. Whole cell extracts containing GST-DHFR (left) and GST alone (right) were loaded, washed, and eluted from glutathione resin columns. Then, the resulting purification fractions were analyzed by SDS-PAGE (A & B) and Western blot with an anti-GST IgG (C & D).
第五部分：GST 蛋白纯化试剂盒组分清单
（共计10个组分，均可单独购买）
| 编号 | 组分名称 | 数量 | 保存 | 注意事项 |
| 下列组分收到后需储存在 4 °C中。 |
| P3401 | Glutathione Agarose Resin 6FF (GSH填料) | 5 mL | +4 °C | 50% slurry，含有2.5mL settled resin，填料可以重复使用10次以上 |
| GST-01 | Binding / Equilibration Buffer for GST Protein (BE缓冲液for GST Protein) | 100 mL | +4 °C |
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| GST-02 | Wash Buffer for GST Protein | 250 mL | +4 °C |
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| GST-03 | Elution Buffer for GST Protein | 100 mL | +4 °C | 温和非变性洗脱液 |
| GST-04 | TCEP | 250 mg | +4 °C |
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| 下列组分收到后需储存在室温中 |
| PURI-04 | 重力柱空柱(12mL)及控流阀 | 1个 | 室温 |
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| PULL-04 | 还原型谷胱甘肽 | 307 mg | 室温 | 按需称取溶解，易于氧化失效 |
| IF9217 | QuickStain™ One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain
蛋白PAGE胶快速染色液（用于显示蛋白条带） | 50mL | 室温 | 超快染色蛋白胶，灵敏度极高，10分钟即可让低至10ng的蛋白显示条带 |
| 下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中 |
| Lysis-01 | 雷霆大肠杆菌裂解液
Bacterial Lysis Buffer for Purification | 50 mL | -20°C | 超级强大，直接裂解大肠杆菌释放蛋白，含有溶菌酶及核酸酶，必须-20度保存 |
| AT0027 | Anti-GST小鼠单克隆抗体 | 25 µL | -20 °C | 用于下游WB检测 |
| AT0098 | 山羊抗小鼠二抗HRP标记 | 100 µL | -20 °C | 用于下游WB检测
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关键字： GST融合蛋白;蛋白表达纯化;GST蛋白纯化试剂盒;GSH;GSH填料;
复名表观遗传学（上海复名医疗科技有限公司），专注于表观遗传学研究工具的开发和表观技术服务的提供。
经过多年和全球著名大学表观研究领域专家教授的交流和探讨，积累经验，精准解决表观研究工具领域的痛点难点，在表观基因组学、表观转录组学和表观蛋白组学领域均开发了一系列研究试剂盒并提供表观技术服务，和哈佛大学，华盛顿大学，斯坦福大学，麻省理工学院，UCSC，UCSF，HHMI，德国海德堡大学，法国国家健康与医学研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所开发的抗体，试剂，试剂盒受到了全球客户的欢迎。
Engibody为复名表观遗传学旗下品牌，所开发的抗体，试剂，表观试剂盒在全球范围内销售，受到众多世界著名大学课题组老师及医药500强巨头的认可和喜爱。
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