活肿瘤组织冻存试剂盒(LT2601)
组织冻存管 X3
组织支架 X3
组织冻存液:
No.1 玻璃化液 1(V1) …………. 1X10ml 管
No.2 玻璃化液 2(V2) …………. 1X10ml 管
组织冻存流程: 清洗、处理组织→玻璃化液 1、2→液氮玻璃化→储存
自备材料:
1. 生理盐水/1XPBS 2. 眼科剪 3. 眼科镊 4. 有齿镊 5. 平口镊 6. 组织处理模具及配套刀片(LT2603) 7. 无菌液氮 8. 无菌液氮盒 9. 秒表或计时器 10. 100mm 培养皿 X4 11. 无菌纱布 12. 水浴锅
操作步骤:
a. 在组织冻存管上记录清楚肿瘤组织的相关信息;
b. 水浴加热并维持玻璃化液 1、玻璃化液 2 为 26℃; 注意:在后续使用玻璃化液 1、玻璃化液 2 时,维持液温为 26℃,有利于提高组织复苏后 的存活率。
c. 在 100mm 培养皿中,用生理盐水清洗肿瘤组织,使用眼科剪、眼科镊修剪 去除血管、包膜以及坏死组织;
d. 使用组织处理模具将肿瘤组织切成 1mm 厚的薄片; 注意:经验证,组织切片的厚度为 1mm。
e. 在 100mm 培养皿中,用生理盐水再次清洗切好的组织,并用无菌纱布吸除 组织表面的液体;
f. 使用平口镊将肿瘤组织切片浸入 V1 管中的 10ml 玻璃化液 1 中,26℃, 25min ;
g. 将 V1 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中,在移入 V2 管前使 用无菌纱布尽量将组织表面的玻璃化液 1 吸除; 注意:尽量减少组织切片从玻璃化液 1 移入玻璃化液 2 之间的操作时间。
h. 使用平口镊将组织切片移入 V2 管中的 10ml 玻璃化液 2 中,26℃, 15min 或 者待组织切片自然沉降至管底;
注意:如果组织切片在 15min 内没有自然沉降至 V2 管的管底,等待至其沉至管底;如果组织切片早于 15min 沉至管底,让组织切片在 V2 管内浸泡至少 15min。
i. 将组织切片平铺摆放于组织支架上;
j. 将组织支架平放于无菌纱布上,尽量吸除组织切片表面的液体;
k. 使用有齿镊将组织支架快速浸入无菌液氮,时间不少于 5min; l. 快速将组织支架移入组织冻存管内,旋紧冻存管,将冻存管移入液氮罐中保 存。
注意:在组织支架移入组织冻存管前,检查组织切片是否透明,透明的组织切片意味着组 织切片成功被玻璃化。
活肿瘤组织复苏试剂盒(LT2602)
组织复苏液:
No.1 复苏液 1 (T1) ………………… 1X30ml 管
No.2 复苏液 2 (T2) ………………… 1X10ml 管
No.3 复苏液 3 (T3) ……………… 1X10ml 管
No.4 复苏液 4 (T4) ……………… 1X10ml 管
自备材料:
1. 有齿镊 2. 平口镊 3. 无菌液氮 4. 无菌液氮盒 5. 秒表或计时器 6. 100mm 培养皿 X3 7. 水浴锅
操作步骤:
a. 水浴加热并维持复苏液 1 为 37℃,复苏液 2、3、4 为 26℃; 注意:在后续使用复苏液 1 时维持液温为 37℃,复苏液 2、3、4 时维持液温为 26℃, 有利于提高组织复苏后的存活率。
b. 使用有齿镊在液氮中旋开组织冻存管并取出组织支架;
c. 迅速将组织支架沉浸入 37℃的复苏液 1 ,并不断轻摇 T1 管,待组织切 片从组织支架上脱落后,取出支架,让组织切片浸泡 3min; d. 将 T1 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中,使用平口镊将组 织切片移入 T2 管中的 10ml 复苏液 2 中,26℃,5min; e. 将 T2 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中,使用平口镊将组 织切片移入 T3 管中的 10ml 复苏液 3 中,26℃,10min; f. 将 T3 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中,使用平口镊将组 织切片移入 T4 管中的 10ml 复苏液 4 中,26℃,10min,即获得复苏后 的肿瘤组织; g. 用生理盐水冲洗后即可移植于免疫缺陷小鼠体内建立 PDX 模型,或用于 其他研究。
注意:尽量减少组织切片从一种复苏液移入另一种复苏液之间的操作时间。
关键字: PDX;玻璃化冻存;活肿瘤组织冻存;样本库
上海科远迪生物科技有限公司成立于2007年,致力于活体生物发光、荧光成像技术和医学冻存技术在中国的推广和应用!目前在南京、杭州等地有10多家代理商。人民卫生出版社2010年出版的《高等学校创新教材-医学实验技术系列》之《组织学与胚胎学实验技术》分册首次将活体动物体内功能成像技术(该书第十一章)写进医学院校教材,标志着该技术在国内的普及应用又上新台阶!本公司创始人参与了第十一章 《活体动物体内功能成像技术》的编写工作!本公司与交通大学第六人民医院合作完成的 《活体生物发光成像技术及其在消化道研究领域中的应用》一文发表在《胃肠病学和肝病学杂志》2010年第四期,本项目由上海市自然科学基金项目(No.04ZB14072) 资助。本公司与浙江大学基础医学院李继承教授,李冬梅博士合作完成的《小动物活体成像技术研究进展》一文发表在《中国生物医学工程学报》2009,28(6):916-921。? ? 我们经过长期的实验研究与反复验证,研发出一系列Livecyte?即用型细胞冻存液系列产品,能有效地提高常规细胞、原代细胞与干细胞的复苏后存活率与活力。产品质量稳定可靠、使用方便,助力科研工作者摆脱程序繁琐、操作复杂、容易污染的传统冻存方法,专注于后续实验研究。该系