蛋白纯化介质-Ni纯化树脂

Ni纯化树脂产品说明：
六聚组氨酸(6xHis)具有分子量小，鉴别方便，便于纯化等优点，在进行重组蛋白表达过程中，普遍作为检测和纯化的常用蛋白标签使用。金属（Ni）镍离子被螯合到固相支持物共价结合的反应性基团上，形成Ni-NTA(次氨基三乙酸)、Ni-IDA(亚氨基二乙酸)，树脂能够特异性的与六聚组氨酸(6XHis)结合。当变性的或者非变性的带有His标签的融合蛋白溶液流经Ni亲和纯化柱时，带有His标签的融合蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，经过洗涤后，不带His标签的蛋白被洗涤下去，结合在Ni纯化树脂的融合蛋白经过一定浓度的咪唑或低PH缓冲液，洗脱条件非常温和，方便快捷的得到高纯度蛋白的同时，可以保持其天然结构和活性，获得的蛋白可以直接用于功能性检测。

主要特色

操作简便—蛋白可在变性/非变性条件下进行纯化，实验室常用仪器和试剂即可满足实验要求。 
兼容性好：可兼容各类变性剂，还原剂等（可兼容10mM DTT）
纯度高：一步纯化即可以得到90%纯度的蛋白
结合能力强：最高蛋白结合量为20mg/ml

使用方法 
1、离心收集500 ml表达目标蛋白的大肠杆菌，冻融或超声破菌于20 ml破菌缓冲液。破菌缓冲液: 20-50 mM Tris-HCl，pH 7.3-8.3，含0.25 M-0.5M NaCl，其它常用缓冲液为PBS。这一步可以适当加入PMSF作为蛋白酶抑制剂，但是不能使用EDTA。还原剂使用2 mM 2-ME，避免使用DTT，因为DTT会造成Ni/Co离子还原。 
2、离心取上清，上样于预先平衡好的纯化柱（10倍柱体积上样缓冲液平衡），通常自然流速可以很好结合。少数情况下，流速过慢，可以使用硅胶管控制上样速度。 
3、样品上完以后，使用破菌缓冲液洗柱10个柱体积，注意将纯化柱侧壁上的残留样品洗干净。 
4、使用10-20倍柱体积洗杂缓冲液将杂蛋白从纯化柱上洗去，如果杂蛋白太多可以加大洗杂体积。洗杂缓冲液：破菌缓冲液中补加咪唑到终浓度20 mM。咪唑可以使用上样缓冲液配制成500 mM母液，用前加入。 
5、洗杂结束以后，使用4-10倍柱体积洗脱缓冲液将目标蛋白洗脱。通常目标蛋白会在第二个柱体积中开始流出。洗脱缓冲液：上样缓冲液中补加咪唑到终浓度200 mM。 
6、收集完成以后，使用10倍柱体积1% 醋酸冲洗纯化柱，再使用PBS/TBS平衡pH，大量蒸馏水水洗柱，最后加入5 ml 20%乙醇，保存在4 ℃，不要在-20 ℃冻结。

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