我公司的全血microRNA(miRNA)提取试剂盒提取小RNA(<200nt)具有操作步骤简单、重复性、产率较高的特点。核酸提取的成功与否、提取质量的好坏对后续实验起着至关重要的作用。使用TRIzol试剂提取总RNA,对总RNA中包含的部分小RNA进行研究,该方法的缺点是总RNA中microRNA的比例较小,同时由于mRNA的干扰,会导致后续反转录和RealTime PCR实验效率很低,很难获得理想的实验结果,且结果不可靠。Biorab在探索miRNA分子功能的过程中开发的全血miRNA提取试剂盒,通过一步上柱即可获得纯度高达98%的不含大RNA的miRNA,而且可在45分钟内完成小RNA的提取。该miRNA提取试剂盒广泛适用于冻存和新鲜的抗凝全血样本(不适用于血清和血浆),每150μl全血可获得~1μg的microRNA。 产品组成:
储存:室温可保存2年。 自备试剂:异丙醇、乙醇、75%异丙醇 注意:miRNA Reagent A溶液中含有胍盐,其具有强烈的腐蚀性,试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施,如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗,再另行就医。 操作方法: 1.向1.5ml EP管中加入300μl miRNA Reagent A。将150μl 抗凝全血加入到上述300μl miRNA Reagent A中,立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置 5分钟 以充分裂解细胞。 2.向上述裂解完毕的裂解液中加入250μl miRNA Reagent B,上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5分钟,吸取550μl上清液,转移到新的1.5ml EP管中。 3.向上述溶液中加入200μl无水乙醇,手腕用力震荡数次,室温放置 5分钟。 4.13000rpm离心10分钟,转移700μl上清液到新的1.5mlEP管中。 5.向上述溶液中加入300μl 异丙醇,手腕用力上下颠倒数次。 6.分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中,13000rpm离心1分钟,倒掉过滤液。 7.向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次,13000rpm离心1分钟,倒掉过滤液。 8.向吸附柱中加入500μl无水乙醇洗涤一次,13000rpm离心1分钟,倒掉过滤液。 9.吸附柱 13000rpm 空离心2分钟,去掉残留的乙醇。 10.将吸附柱放入到新 1.5ml EP管中,室温放置 2分钟,使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μl RnaseFree TE Buffer,室温静置 2分钟,13000rpm离心2分钟,洗脱产物即为提取的miRNA。(通常取3~5μl该产物,即可使用我司TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应,货号:MT0006)。 图例:应用全血miRNA提取试剂盒(MT0002)提取全血的microRNA。 泳道1-3:-80℃冻存一年的全血; 泳道4-6:新鲜抗凝全血。 常见问题: 1.本方法提取的小 RNA,95%以上为小 RNA(<200nt),有时会残留一些>200nt的RNA,通常残留的>200nt RNA不影响后续试验操作。 2.本试剂盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的RNA,因此更适合做后续反转录试验,从而进行定量试验。 3.使用本试剂盒提取的microRNA 浓度通常在50ng/μl 左右,取5~10μl即可用于电泳检测。取3~5μl即可用于我司TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应(货号:MT0006),通常使用我司优化的miRNA-TaqMan RealTime PCR技术(货号:MTTxxxxx)。
北京百奥莱博科技有限公司
联系商家时请提及chemicalbook,有助于交易顺利完成!