L6 大鼠成肌细胞

细胞名称：L6    大鼠成肌细胞

组织来源：骨胳肌；成肌细胞

培养条件：DMEM +10% FBS

形       态：贴壁；成肌细胞

背       景：该细胞是Yaffe在甲基胆蒽存在的情况下从大鼠大腿肌原代培养的zui初两代细胞中分离得到的；在培养基中融合形成多核的肌管和横纹肌纤维，细胞融合的程度随着代数的增加而下降，因此细胞应低代次冷冻并周期性地重新克隆以选择融合能力强的细胞。该细胞应在达汇合状态前传代，以延缓细胞分化能力的丧失，如果让培养容器中的细胞长满，这株细胞的成肌组分将迅速耗尽。

L6(大鼠成肌细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

formazan结晶的生成量仅与活L6(大鼠成肌细胞)数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

1.接种：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个接种到96孔板，每孔体积200ul.

2.L6(大鼠成肌细胞)培养：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3.呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。

4.比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制L6(大鼠成肌细胞)生长曲线。