产品规格 (CAT#: LM1060)
BY4741 Competent Cell: 100μl/支 保存: -80℃(3个月)
pYES2 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存:-80℃(12个月)
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存:-20℃(12个月)
PEG/LiAC: 5ml 保存: 4℃(12个月)
BY4741感受态细胞基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52
BY4741感受态细胞产品说明
BY4741菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C,是实验室的常用菌株,为配子MATa型,广泛应用于钠,钾离子平衡;细胞抗盐;各种金属离子的吸收;重金属毒性;各种糖类,碳源对真核生物细胞生长的影响;过氧化物,超氧化物的吸收与运输的研究中。BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入BY4741细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板板进行筛选。唯地生物生产的BY4741感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pYES2质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
BY4741感受态细胞操作方法
1. 取100 μl冰上融化的BY4741感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒1-3 μg,Carrier DNA (96℃水浴3 min,快速冰浴
3 min,重复一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
2. 将感受态移到42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 μl 重悬,离心 30s弃上清。
4. ddH2O 50 μl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
注意事项
1. 感受态细胞在冰上融化。
2. 若使用pYES2质粒表达蛋白,需在培养基中加入2%的半乳糖(筛选培养基中不用加半乳糖;当需要目的蛋白表达时,需加入半乳糖代替葡萄糖作为碳源),以诱导目的基因的表达。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
5. 酵母为真核生物,不易长期保存,随感受态在-80℃保存时间的延长,转化效率会不断下降,建议保存时间不超过90天。
6. BY4741酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
7. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。
关键字: BY4741_感受态细胞_基因_
上海联迈生物工程有限公司(LMAI Bio)是一家经营生物、仪器、试剂、耗材等科研产品的高新技术生命科学公司,在广大用户的帮助和支持下,经过不懈的努力, 已成为国内生命科学领域产品的一家供应商,代理许多国际先进水平的高科技产品,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、诊 断等多个研究及应用领域。 公司的服务和业务网络遍及全国,在同行获得一致好评。 特别是生物试剂和细胞产品更是种类齐全、价格实惠,美国原装进口原代细胞,专业培养基,常用传统培养基,细胞培养用的相关试剂,氨基酸,抗生素,维他命类产品品种齐全,试剂耗材种类繁多。 公司的规模和产品种类日益扩大和更新,我们一直秉承着代理优质品牌的产品,服务好每一位顾客,将