培养条件
培养基:DMEM/F12+10%FBS
气相:空气,95%;二氧化碳,5%
温度:37℃
细胞描述
名称:C57小鼠外周血自然杀伤细胞
数目:大于106 /管
活力:>90%
冻存:DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO
运输:干冰运输(1管)或者活细胞一瓶
用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗
细胞传代方法
显微镜下观察细胞,当覆盖80%底面积时,进行细胞传代。注意不要等到细胞覆盖100%的时候才传代,那样细胞容易老化。
在生物安全柜或者超净台中,将培养瓶中的培养基倒到废液缸中
用PBS或者生理盐水洗一遍
加入1.5ml 0.25%含有EDTA的胰酶,在37℃培养箱中消化3-5分钟
然后取出细胞,加入5ml培养基,吹打均匀后,转移到15ml离心管中,1000rpm 离心5分钟
离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:3-1:5的比例进行细胞传代培养。
注:C57小鼠外周血自然杀伤细胞不宜进行多次传代培养,使用新鲜的p0代细胞进行实验。
细胞复苏方法
取出冻存管后,投入37℃水浴中,震荡解冻2 min,
酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基
将离心管离心(1000rpm,5 min)
弃去上清,再加入5ml 自然杀伤细胞完全培养基,转入培养瓶中培养。
细胞冻存方法
本品使用DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO 冻存液冷冻。
关键字: 小鼠外周血自然杀伤细胞
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