人多能干细胞分化培养基
产品基本信息
Applied CellTM人多能干细胞(ES/iPS)分化培养基
基础培养基2-8℃,添加剂-20~-80℃;
混匀后2-8℃,2周内使用完毕。
产品简介
人多能干细胞分化培养基是埃泽思生物科技有限公司(Applied CellTM)研发的一款适用于人多能干细胞诱导分化的培养基。该培养基可用于EB(拟胚体)的形成。拟胚体是人多能干细胞在悬浮培养条件下形成的球状结构,可用于细胞多能性检测,形成拟胚体可验证细胞分化潜能。
产品特性
产品内容
hPSC Differentiation Basal Medium
人多能干细胞分化基础培养基
hPSC Differentiation Supplement
人多能干细胞分化添加剂
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操作方法
实验准备
人多能干细胞分化培养基配制:
1.1 在2-8℃解冻人多能干细胞分化添加剂,轻晃摇匀;
1.2 随后将添加剂加入到人类多能干细胞分化基础培养基中(每10mL添加剂与500mL分化基础培养基彻底混合)混匀即为人多能干细胞分化培养基(AC-1001002)。人多能干细胞分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意:
1. 人多能干细胞分化添加剂只能在2-8℃解冻,可按实际用量对添加剂进行分装,分装后立即使用或储存于-20℃至-80℃保存。
2. 人多能干细胞分化培养基使用前建议在室温平衡10-20min,不建议在37℃加热。
实验操作(以6孔板为例)
2.1 在显微镜下观察人多能干细胞,确认细胞汇合度达到70–80%,准备传代。
2.2 清洗:拿出培养板,吸掉原有培养基,沿培养皿边缘缓慢加入37℃预热PBS缓冲液,轻轻晃动冲洗,然后吸去PBS缓冲液;
2.3 消化:在培养板中加入1.5mL人多能干细胞无酶消化液(AC-1001008)使之覆盖皿
底,并置于37℃,5%CO2培养箱中孵育2~5 min;
2.4 吹打:吸掉人多能干细胞消化液(AC-1001008)后,立刻加入室温平衡好的人
多能干细胞分化培养基,用移液枪扇形吹打培养皿底,吹打次数保持在
3~5次,使皿底贴附的干细胞集落脱落,轻柔缓慢吹吸混匀,制成干细胞悬液;
注意:吹吸皿底细胞的力度要轻柔,吹打脱落和吹吸混匀的次数在3~5次为宜,尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。
3.5制备拟胚体
3.5.1悬滴培养法制备拟胚体
稀释:将细胞悬液稀释,细胞密度约为1-2×105cells/mL;
制备悬滴:将稀释好的细胞悬液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均匀接种在培养皿皿盖内面,翻转培养皿盖将其扣回加有PBS的培养皿上(加入PBS防止悬滴蒸发),放入37℃,5%CO2箱中培养;
3-4天后,非贴壁型培养皿中预先加入人多能干细胞分化培养基,将培养皿盖上的悬滴转移至培养皿中(6cm培养皿加入3-4mL培养基)中,可观察到明显的拟胚体结构,轻轻晃动培养皿使拟胚体均匀分布在培养皿中继续培养。
3.5.2悬浮培养法制备拟胚体
3.6换液
换液频率:使用悬滴法制备拟胚体,将悬滴接入非贴壁型培养皿继续培养后,每2-3天换一次液;使用悬浮培养法制备拟胚体,大约在第3天形成明显的拟胚体结构,可进行初次换液,后续每2-3天换一次液;
换液方法:将需换液的拟胚体悬液转移至15mL/50mL离心管中,静置约3min,待拟胚体沉降至管底,吸掉上清,加入室温平衡好的人多能干细胞分化培养基,用巴士滴管轻轻转移至非贴壁型培养皿中,轻轻晃动培养皿使之均匀分布在培养皿中,37℃,5%CO2培养箱中继续培养。
质量控制
关键字: 多能干细胞、多能干细胞分化培养基;
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