人成纤维细胞无血清培养基
产品基本信息
产品简介
人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司(Applied CellTM)自主研发的一款适用于人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维细胞原代分离、扩增与传代培养,且不含动物血清,内毒素水平低于药典标准(<0.06EU/mL)。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。
产品特性
产品内容
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操作方法
人成纤维细胞传代培养:
人成纤维细胞培养基配制
1.2将添加剂以10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中,混匀,即为人成纤维细胞培养基(AC-1001015)。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周,不建议使用已配制超过3周的培养基。
1.3人成纤维细胞培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的原代分离、扩增与传代培养。
操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)
人成纤维细胞复苏(10cm dish)
2.1 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞,迅速放入37℃水浴快速融解。
2.2 在生物安全柜或超净台中,将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人成纤维细胞培养基(AC-1001015)。
2.3 1000rpm 离心3 min,吸掉上清,加入10ml人成纤维细胞培养基重悬细胞。
2.4 将细胞均匀铺到培养皿中,水平十字振动培养皿使细胞均匀分布,5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。
2.5 24h后更换新鲜人成纤维细胞培养基继续培养,每2-3天更换培养液。
人成纤维细胞传代培养
1. 在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到90%,即可传代。
2. 在超净台/安全柜中,吸掉原有培养基,加入PBS溶液清洗一次,加入Xeno-Free细胞消化液(AC-1001024/1001025)使之完全覆盖皿/瓶底。
3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基,用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。
5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心3 min。
6. 弃上清,加入人成纤维细胞培养基,重悬细胞,计数。1:2-1:4比例传代,或按2-5x104 cells/cm2 传代,均匀铺在培养皿/瓶中,置于37℃,5%CO2 培养箱中培养。
注意:人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关,所以传代时细胞密度不宜过稀。
人成纤维细胞冻存
1. 细胞达到90%汇合度, 吸掉原有培养基,PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free细胞消化液(AC-1001024/1001025)使之完全覆盖皿/瓶底,室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟,显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞培养基,用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞,并轻轻吹打混匀,使细胞完全分散。
4. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中,1000 rpm离心3 min,吸掉上清。
5. 加入适量Serum-free细胞冻存液(AC-1001005/1001006),调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右,每支冻存管分装1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃,24h后转入液氮中长期保存。
质量控制
关键字: 细胞无血清培养基;
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