Human Insulin ELISA Kit (Ultrasensitive)

      碧云天的Human Insulin ELISA Kit (Human Insulin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人胰岛素酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Insulin的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为1.54mIU/L，与人的C肽、Proinsulin、IGF-I、IGF-II和大鼠胰岛素、小鼠胰岛素等均没有交叉反应，与猪、绵羊和牛的胰岛素分别有37.4%、48%和31%的交叉反应性。板内、板间变异系数均小于10%。
      胰岛素(Insulin)是一种肽类激素，属于Insulin-like蛋白家族，该家族还包括胰岛素样生长因子(IGFs)、松弛肽和其他Insulin-like多肽。胰岛素主要由胰岛B细胞产生，主要调控葡萄糖代谢，维持能量平衡。Insulin分泌异常会导致糖尿病的发生，糖尿病主要分为两类：一型糖尿病(T1D，胰岛素依赖)和二型糖尿病(T2D，胰岛素非依赖性)。T1D主要是由于胰岛B细胞无法正常分泌胰岛素所导致，而T2D则是由于胰岛素抵抗所引起。糖尿病的并发症主要包括心脏病、中风、高血压、失明、肾脏疾病和神经病。在美国，糖尿病已成为了第七大致死疾病。
      胰岛素体内合成时首先合成含有信号肽的前蛋白质原，信号肽被剪切后得到86个氨基酸长度的前胰岛素原，在经过进一步的酶切作用后得到33个氨基酸的B链、21个氨基酸的A链以及34个氨基酸的C链。成熟的人胰岛素是由A链和B链经由二硫键连接所形成的异质二聚体，与猪胰岛素和犬胰岛素具有99%的氨基酸同源性，与牛胰岛素具有94%的氨基酸同源性，与小鼠、大鼠、猫及绵羊的胰岛素具有92%的氨基酸同源性。胰岛素以Zn2⁺结合的六聚体形式储存于胰岛B细胞中，分泌时以不含Zn2⁺的单体结构分泌至肝门静脉血管中，以实现在肝脏中的富集。胰岛素能够持续分泌使浓度维持在一个基础水平，进食后，胰岛B细胞将会分泌大量的胰岛素，控制血糖。
      胰岛素受体(Ins R)是一种酪氨酸激酶受体，在所有细胞中都有不同程度的表达。胰岛素通过与两分子受体结合并形成三聚体实现信号传递。受体与胰岛素结合后，可以增加靶细胞对葡萄糖的摄取。Ins R主要存在两种形式,同源二聚体和与IGF-I受体形成的异源二聚体。这两种形式的受体都能与胰岛素、IGF-I、IGF-II结合，只是亲和力有所不同。胰岛素、IGF-I和IGF-II的浓度及细胞表面受体的表达数量均能影响并调控胰岛素信号通路的激活。
      胰岛素的信号通路较为复杂，主要是胰岛素与受体结合从而激活PI3K-AKT信号通路。Insulin的信号通路参见图1。

图1. Insulin的信号通路示意图。

      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人Insulin的浓度，其原理见图2。人Insulin特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人Insulin会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记人Insulin抗体后，辣根过氧化物酶标记人Insulin抗体与人Insulin结合，形成夹心的免疫复合物。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人Insulin浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人Insulin浓度。

图2. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。