即用型GUS染色液
产品简介
GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。
即用型GUS染色液又称β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒 (β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit) 简称为GUS染色液，其染色原理是适宜的反应条件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。GUS染色液可用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色，多用于转基因植物的GUS基因表达分析，该即用型试剂比常规GUS染色液操作简便。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料：①70%乙醇；②去离子水；③小瓶或多孔板、显微镜；
贮存和效期：
未配制的试剂盒按照温度贮存，有效期至少1年。
配制好的 X-gluc 溶液-20℃避光保存 30 天，长期-80℃保存；GUS 染色缓冲液 4℃贮存；GUS染色工作液现用现配，短期贮存可以-20℃保存 2-3 天。
使用方法
1、配置 X-Gluc Solution（50×）：取1mL X-Gluc Solution完全加至1支X-Gluc中，全部溶解，即获得X-Gluc Solution（50×）。配置好的X-Gluc Solution（50×）可存放于-20℃保存，1个月有效。
2、配制X-Gluc染色工作液：取适量的X-Gluc Solution(50x)和GUS Buffer，按1:49比例充分混匀，配制成X-Gluc染色工作液，如取0.2ml X-Gluc Solution(50x) 加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色工作液，该染色工作液现用现配，短期贮存可以4℃保存3天。
3、取材：将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片，可放于离心管中。
注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞。取适量待染叶片等组织加入适量GUS染色液，使GUS染色液完全浸没组织。
4、取适量待染叶片等组织加入适量GUS染色工作液，使GUS染色工作液完全浸没组织。37℃孵育1~24小时，随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。亦可用锡箔纸包好后摇床摇动 10 分钟或更长时间至材料出现蓝色。注意要做阴性和阳性对照实验。
5、用70%乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1~3小时，至阴性对照呈白色。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察，白色背景上的蓝色即为GUS表达位点。GUS 染色阳性的蓝色斑点很稳定，在酒精中不褪色。
6、一般染色后，GUS 染色阳性的蓝色斑点肉眼就能看到。但是有些材料可能蓝色斑点很细微，要在显微镜下才能看到。
注意事项
X-Gluc Solution(50x)应避免反复冻融，否则染色效率会下降。
The GUS reporter system (GUS: β-glucuronidase) is a reporter gene system, particularly useful in plant molecular biology and microbiology. Several kinds of GUS reporter gene assay are available, depending on the substrate used. The term GUS staining refers to the most common of these, a histochemical technique.
The purpose of this technique is to analyze the activity of a promoter (in terms of expression of a gene under that promoter) either in a quantitative way or through visualization of its activity in different tissues. The technique is based on β-glucuronidase, an enzyme from the bacterium Escherichia coli; this enzyme, when incubated with some specific colorless or non-fluorescent substrates, can transform them into coloured or fluorescent products.
Reference: Jefferson, R. (1987) Plant Mol. Biol. Reporter, 5:387-405.
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