Karnovsky固定液是组织化学中最常用的混合型固定液之一,主要成分含能快速渗透的多聚甲醛和缓慢渗透的戊二醛。它能很好保存组织的抗原性和精细结构,故尤其适用于电镜免疫化学样品的固定。本产品是在Karnovsky原始配方的基础上修改而得,它具有下列特点:
1.既可用于灌注法固定,也可用于浸泡法固定。
2.渗透能力强,固定均匀,组织收缩小,染色效果好。
3.适用范围广,可以用于固定从细菌、真菌,植物到动物的各种生物材料。
4.对原始配方进行了改良,不使用有毒的含砷化合物,减少了对操作者的毒害。
5.固定的组织经过包埋切片等处理用既可用于光学显微镜检测,也可用于电子显微镜检测。
操作步骤:
1.对动物,最后先灌注固定,然后再浸泡固定10-30分钟。对植物、真菌、细菌、病毒、原虫等材料,直接采用浸泡法固定。浸泡在Karnovsky固定液中的材料可以在4℃放置5年。
2.固定后的组织洗涤后即可用于包埋、切片、染色、检测等后续操作。
Karnovsky固定液固定时的注意事项:
(1)固定液量:20倍于材料的体积,以免固定液被稀释。
(2)选择合适的固定液:渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中,又不使组织过度收缩或膨胀。
(3)固定的时间要合适:
与材料的大小和温度有关:材料大则时间长,材料小则时间短;温度高则时间短,温度低则时间长。
经固定的材料如不及时使用,可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时,再换入一次70%酒精,在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次,效果较好。
Karnovsky固定液固定的条件:
(1)迅速渗入组织,杀死原生质。在杀死的短时期中,细胞形态不致有所变化。
(2)必须具有渗透力,对组织各部分的渗透力相等,可使组织内外完全固定。
(3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。
(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。
(5)增加细胞内含物的折光程度,易于鉴别。
(6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬,具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生质以后,增加细胞对于各种穿透的抵抗力,不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。
存储与运输:常温运输,2-8℃冷藏保存。
有效期12个月。
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