注意事项: 1. 膜再生液实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下将抗体洗脱下来,实际操作中,膜类型、抗体类型、浓度及抗原特性都影响洗脱难易度。 2. 适用于 ECL 和类似的化学发光试剂进行的 Western 检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western检测,例如 DAB,NBT/BCIP。 3. 用 ECL 显色后,再生液洗脱几分钟后,可再次加入 ECL 显色液显影,如胶片上显示条带,表明抗体未除净,须进一步在再生液中浸泡,至胶片上无显色。 4. 使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用 BSA 封闭的膜更容易再生。 5. 尽量避免让膜干燥。
在遇到一抗二抗去除效果欠佳时,可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间,同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液,以摸索出的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。
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