Caspase-8也称FLICE、MACH或Mch5,通常以酶原的形式存在,凋亡时激活,被认为是细胞凋亡转导过程的上游caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的凋亡过程中caspase-8被激活形成二聚体,进而激活下游caspase-4、6、9、10。 细胞凋亡属于程序化细胞死亡,可见于各种器官和细胞,在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族,包含10多个成员。Caspase-8也称FLICE、MACH或Mch5,通常以酶原的形式存在,凋亡时激活,被认为是细胞凋亡转导过程的上游caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的凋亡过程中caspase-8被激活形成二聚体,进而激活下游caspase-4、6、9、10。试剂盒测定原理基于Caspase-8特异水解其多肽底物Ac-IETD-pNA (N-acetyl-Ile-Glu-Thr-Asp-p-nitroanilide),释放出游离的硝基苯胺pNA,后者呈黄色在405 nm具有吸收峰,用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-8的水解活性。反应体系100微升,试剂盒提供的试剂,除标准曲线外可进行50或100次样品测定。 适用:测定哺乳动物组织、细胞caspase-8活性。 组成与储存: 1. 裂解缓冲液: 20 ml ,4 ºC 2. 反应缓冲液: 10 ml ,4 ºC 3. 2 mM Ac-IETD-pNA底物: 0.5 ml,-20 ºC避光 4. 10 mM pNA标准品: 0.5 ml,-20 ºC避光 以上标出的量为100次检测,50次检测的试剂量减半。试剂常温运输。到达后按要求储存,1年内稳定。 所需仪器: 酶标仪与96孔酶标板;或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。 工作波长:吸收波长405 nm,如不具备也可在400~450 nm范围内测定。
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