名称 蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit) 规格 20T 试剂组分 试剂(A): Silver Stain Sensitizer(500×) ----2x1ml----RT 试剂(B): Silver Stain(100×)----10ml----RT 避光 试剂(C): Silver Stain Developer(5×)----2×200ml----RT 避光 试剂(D): Silver Stain Stop Buffer(10×)----100ml----RT 自备材料: 1、 水平摇床或侧摆摇床 2、 去离子水(超纯) 3、 乙醇、冰乙酸 注:有效期12个月 产品简介 蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 等蛋白银染染色的试剂盒,该试剂盒含有增敏步骤,可明显降低背景。其优点还在于:1、操作简单、快速;2、可用于 2D 凝胶的银染,并可进行后续的质朴检测;3、目的条带清晰;4、不含甲醇。 Protein Fast Silver Stain Kit 不 Protein Silver Stain Kit 相比,前者操作速度更快,当检测灵敏度可能低于后者,尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。 本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 使用说明 操作步骤(仅供参考): 1、 准备工作:以下操作以 8.5×5.5cm、厚度为 1.0mm 的凝胶为例,以凝胶全部浸没到溶液为准,一般用量是 25ml,对于凝胶体积较大的,各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行,摇床转速控制在 60~70rpm。提前配制固定液,即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗涤液,即按无水乙醇:去离子水=1:4 的比例配制。 2、水洗:电泳结束后,取凝胶放入去离子水中清洗 2 次,每次 5min。 3、固定:取凝胶放入 50~100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 15~20min,重复固定步骤 1 次。 4、洗脱:取凝胶放入洗涤液中清洗 2 次,每次 5min。 5、水洗:去离子水清洗凝胶 2 次,每次 5min。 6、增敏:配制银染增敏工作液,即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Sensitizer, 一般应2h内用完。室温下用1×Silver StainSensitizer 孵育凝胶 2min,立即用去离子水清洗凝胶 2 次,每次 1min。 7、银染:配制银染工作液,即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去离子水中,混匀,即得 1×Silver Stain,一般应 2h 内用完。取凝胶入 1×Silver Stain,在摇床上室温摇动 10~20min。 8、水洗:弃液,在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次,每次 30s,摇动速度在 60~70rpm。总的水洗时间应控制在 1.5min 内。 9、显影:配制银染显影工作液,即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去离子水中,混匀,即 1×Silver Stain Developer,一般应 30min 内用完。清洗凝胶后,立即置于 1×Silver Stain Developer 中,室温孵育 2~10min,直至蛋白条带清晰可见。一般显色 30s 后就会出现棕色沉淀,继续显影 2~3min,亦可延长至 5min 以上,如果显影效果不佳,可重新更换 1×Silver Stain Developer 继续显影。 10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度,背景染色。立即加入银染终止液,摇床上摇动 10min,以终止显色反应。 (配制银染终止液,即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml加入到 90ml 去离子水中,混匀,即 1×Silver Stain Stop Buffer,一般应 24h 内用完。 ) 11、保存:弃终止液,加入去离子水 50ml,摇床上摇动 2~5min,弃液。短期保存于新鲜去离子水,长期保存可以制备干胶。 注意事项 1、由于银染非常灵敏,操作时请注意尽量使用高纯度的水,并确保所使用的器皿非常清洁,使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套,避免皮肤和凝胶直接接触。 2、需自备乙醇、乙酸及MilliQ级纯水或双蒸水。 3、本说明书所指的室温为20-25℃,操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降,各步骤需适当延长时间。 4、银染基本显色液(5X)在低温环境下可能会出现少量沉淀,可在30-50℃水浴中溶解,并充分混匀后使用。至少后续稀释至1X后须确保完全溶解。 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 常见问题 1、背景过深:①显色时间过长;②洗涤不充分;③凝胶中残留物质未去除干净;④去离子水的纯度过低。 2、蛋白条带较浅:①蛋白的半胱氨酸含量过低;②银染后水洗时间过长;③蛋白量较低;④固定后的洗涤时间不够,导致乙酸残留。 3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹:①凝胶没有被充分浸没,应加入足量溶液;②容器没有清洗干净;③凝胶接触金属物质;④指纹或其他压迹。
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