福尔根DNA染色液(Feulgen stain)
货号:RS1710
规格:3×50ml/3×100ml
保存:4℃,避光,6个月
试剂盒组成:
简介:
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等,其中最经典的是Feulgen法, Feulgen法是一种经典的酶组织化学法。
Feulgen stain 的原理在于:DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开,并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开,在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff reagent结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团),所以凡含有DNA的部位,就呈紫红色。但是该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键,因此RNA用此法处理后则分解,所以该法不适用于证明RNA。
操作步骤(仅供参考):
(一) 石蜡切片染色
1、 组织固定:Carnoy固定的石蜡切片较好,10%的福尔马林亦可,不宜使用Bouin固定液。
2、 弱酸工作液的配制:
按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制,即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份,充分混合,即获得弱酸工作液。
3、 石蜡切片脱蜡至双蒸水。
4、 切片室温下在弱酸工作液中浸洗一下。
5、 切片放入已预热到60℃的弱酸工作液,孵育8min。
6、 切片放入室温的弱酸工作液中冲洗1min。
7、 蒸馏水冲洗。
8、 切片入Schiff reagent内,置于室温暗处染色30~60min。
9、 在上述染色过程中,配制SO2水工作液。
按照亚硫酸盐溶液:弱酸溶液:蒸馏水=5:1:94的比例配制SO2水工作液,即取亚硫酸盐溶液5份、弱酸溶液1份、蒸馏水94份,充分混合,即获得SO2水工作液。即配即用,不易久置。
10、 用新鲜配制的SO2水工作液洗切片3次,每次90s。
11、蒸馏水中洗净。
12、经系列乙醇脱水。
13、二甲苯透明并封片。
(二)冰冻切片染色
1、 冰冻切片预处理:先用乙酸1份、无水乙醇3份混合后,即为固定液,固定10min。
2、 由无水乙醇脱水--逐级下行--双蒸水。
3、 弱酸工作液的配制:
按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制弱酸工作液,即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份,充分混合,即获得弱酸工作液。
4、 余下步骤同上述石蜡切片染色。
染色结果:
细胞核内DNA 红紫色
阴性对照: 将同样切片经上述步骤, 只有步骤5改为放入室温的弱酸工作液,室温放置15min。其结果为细胞核DNA阴性。
注意事项:
- 水解时间很重要,并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。
2、 注意Schiff reagent的纯净程度,若变浅粉红亦可考虑使用,颜色变红则不能用。
3、 去除切片上多余的Schiff reagent的方法应以SO2水洗法为好。
4、 应作阴性对照试验。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
关键字: 福尔根;DNA染色;Feulgen stain
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