柱式DNA胶回收试剂盒（又名柱式DNAback）

柱式DNA胶回收试剂盒（又名柱式DNAback）
产品及特点 本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系，可以从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段，回收效率可达50-90%（跟片段大小相关）。本产品的特点如下:

1. 高效，回收效率最高可达90%（跟片段大小和胶浓度等因素有关），可以跟跟国外著名厂家的产品媲美。

2. 快速，整个过程只需要十余分钟。洗脱液不需要额外加乙醇。

3. 两用，既可用于胶回收，也可以用于PCR或其他酶反应回收。

4. 范围广，回收DNA的长度范围为50 bp-40 Kb（但效率各不相同）。

5. 能回收单链、双链及环状DNA，吸附量为10ug。

6. 回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。

7. 本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条（每片胶条重量不超过250mg），可以纯化50次酶反应（包括PCR反应，每次体积不超过250uL）。
柱式DNA胶回收试剂盒（又名柱式DNAback）
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
通用溶胶液 60409 25 mL
吸附柱活化液 170602 25 mL
通用洗柱液 60408 50 mL
离心吸附柱(窄口) 60911 50 套
DNA 洗脱液 3.0 170603 10 mL
使用手册 60202sc 1 份

柱式DNA胶回收试剂盒（又名柱式DNAback）运输及保存 常温运输及保存，有效期为一年。由于通用溶胶液 2.0 是高盐溶液，因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀，需要 60℃加热溶解后才可以使用。 

自备试剂 异丙醇

使用方法 一：对胶回收：

1. 用干净的刀片切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶（100 mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率），放入一干净的 1.5 mL 塑料离心管（自备）中称重，按重量比为 1：2 的比例加入通用溶胶液 2.0 (0.1 g 的琼脂糖凝胶需要加入 0.2mL 的通用溶胶液 2.0)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于 2%，则需要按 1：3 的比例加入通用溶胶液 2.0 溶解胶块。

2. 50℃保温 10 分钟使胶完全溶化，每隔 2-3 分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在 300bp 以下，建议不要 50℃保温，而是延长溶胶时间，以免 DNA 变性，影响回收率。

3. 在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液，套上收集管后室温放置 2 分钟，然后 12,000 rpm 离心 2 分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

4. 在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积 1/2 的异丙醇（对 100mg胶块，加 50uL），快速振荡 10 秒混匀。

5. 将溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，静置 3 分钟。注意：静置有助于 DNA 与离心吸附柱的硅胶膜结合。本产品提供的离心吸附柱的上样体积为 0.8mL，若溶胶液的总体积大于 0.8mL，一次加不完，可以分多次将溶液加入到吸附柱中。

6. 12000-15000 g 离心 1 分钟，倒掉收集管中的穿透液。

7. 加入 0.7mL 通用洗柱液于离心柱中，12000-15000 g 离心 1 分钟，倒弃收集管中的废液。如果回收的 DNA 用于盐敏感实验（如平末端连接或直接测序）,建议加入通用洗柱液后静置 2-5 分钟再离心。

8. 12000-15000 g 离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。

9. 将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管（自备）中，悬空加入 50 uLDNA 洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。注意：如果回收的 DNA 用于测序，则可用重蒸水（自备）洗脱 DNA。DNA 洗脱液可以也用 TE 替代，但用水或 TE 替代 DNA 洗脱液 3.0 时，回收率可能稍有降低。

10. 静置 3 分钟后 12000-15000 g 离心 1 分钟。

11. 离心管底部所得溶液即为纯化的 DNA 溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得 DNA 溶液再次加回到离心吸附柱中，重复洗脱过程，将得到更多的 DNA。

12. 用电泳方法或测 OD 方法确定回收所得 DNA 的浓度，1 OD260 对应的浓度是 50ug/mL（对双链 DNA）或 40ug/mL（对单链 DNA），纯净 DNA的 OD260/OD280 比值应该在 1.8 左右。注意：OD 读数跟 pH 相关，如果用自备的重蒸水洗脱，OD 值会低于在 DNA 洗脱液 3.0 中测定的数字。

二：PCR 或其他酶反应回收

13. 直接在 PCR 或其他酶反应管中加 2 倍体积的通用溶胶液，振荡 10 秒混匀。如果 PCR 反应中使用了石蜡，需要预先去除。

14. 活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液，套上收集管后室温放置 2 分钟，然后 12,000 rpm 离心 2 分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

15. 在上柱前，在反应液和溶胶液的混合液中加入相当于反应体积 1/2 的异丙醇（对 100uL 的反应液，加 50uL），快速振荡 10 秒混匀。

16. 直接进入上面胶回收操作的第 5 步并进行后面的操作。