柱式DNA胶回收试剂盒(又名柱式DNAback)
产品及特点 本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系,可以从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中高效快速回收DNA片段,回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。本产品的特点如下:
1. 高效,回收效率最高可达90%(跟片段大小和胶浓度等因素有关),可以跟跟国外著名厂家的产品媲美。
2. 快速,整个过程只需要十余分钟。洗脱液不需要额外加乙醇。
3. 两用,既可用于胶回收,也可以用于PCR或其他酶反应回收。
4. 范围广,回收DNA的长度范围为50 bp-40 Kb(但效率各不相同)。
5. 能回收单链、双链及环状DNA,吸附量为10ug。
6. 回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR、测序等多种分子生物学实验。
7. 本试剂盒足够纯化50片含DNA的琼脂糖凝胶条(每片胶条重量不超过250mg),可以纯化50次酶反应(包括PCR反应,每次体积不超过250uL)。
柱式DNA胶回收试剂盒(又名柱式DNAback)
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装
通用溶胶液 60409 25 mL
吸附柱活化液 170602 25 mL
通用洗柱液 60408 50 mL
离心吸附柱(窄口) 60911 50 套
DNA 洗脱液 3.0 170603 10 mL
使用手册 60202sc 1 份
柱式DNA胶回收试剂盒(又名柱式DNAback)运输及保存 常温运输及保存,有效期为一年。由于通用溶胶液 2.0 是高盐溶液,因此在低温时容易产生沉淀。如果产生沉淀,需要 60℃加热溶解后才可以使用。
自备试剂 异丙醇
使用方法 一:对胶回收:
1. 用干净的刀片切取含 DNA 片段的琼脂糖凝胶(100 mg 左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入一干净的 1.5 mL 塑料离心管(自备)中称重,按重量比为 1:2 的比例加入通用溶胶液 2.0 (0.1 g 的琼脂糖凝胶需要加入 0.2mL 的通用溶胶液 2.0)。如果琼脂糖凝胶的浓度大于 2%,则需要按 1:3 的比例加入通用溶胶液 2.0 溶解胶块。
2. 50℃保温 10 分钟使胶完全溶化,每隔 2-3 分钟振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在 300bp 以下,建议不要 50℃保温,而是延长溶胶时间,以免 DNA 变性,影响回收率。
3. 在等待期间,活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液,套上收集管后室温放置 2 分钟,然后 12,000 rpm 离心 2 分钟,倒弃穿透液,再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4. 在上柱前,在溶化的胶中加入相当于胶块体积 1/2 的异丙醇(对 100mg胶块,加 50uL),快速振荡 10 秒混匀。
5. 将溶液转移到离心吸附柱中,套上收集管,静置 3 分钟。注意:静置有助于 DNA 与离心吸附柱的硅胶膜结合。本产品提供的离心吸附柱的上样体积为 0.8mL,若溶胶液的总体积大于 0.8mL,一次加不完,可以分多次将溶液加入到吸附柱中。
6. 12000-15000 g 离心 1 分钟,倒掉收集管中的穿透液。
7. 加入 0.7mL 通用洗柱液于离心柱中,12000-15000 g 离心 1 分钟,倒弃收集管中的废液。如果回收的 DNA 用于盐敏感实验(如平末端连接或直接测序),建议加入通用洗柱液后静置 2-5 分钟再离心。
8. 12000-15000 g 离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
9. 将离心柱吸附置于一新的干净的塑料离心管(自备)中,悬空加入 50 uLDNA 洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央。注意:如果回收的 DNA 用于测序,则可用重蒸水(自备)洗脱 DNA。DNA 洗脱液可以也用 TE 替代,但用水或 TE 替代 DNA 洗脱液 3.0 时,回收率可能稍有降低。
10. 静置 3 分钟后 12000-15000 g 离心 1 分钟。
11. 离心管底部所得溶液即为纯化的 DNA 溶液,可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。如果将所得 DNA 溶液再次加回到离心吸附柱中,重复洗脱过程,将得到更多的 DNA。
12. 用电泳方法或测 OD 方法确定回收所得 DNA 的浓度,1 OD260 对应的浓度是 50ug/mL(对双链 DNA)或 40ug/mL(对单链 DNA),纯净 DNA的 OD260/OD280 比值应该在 1.8 左右。注意:OD 读数跟 pH 相关,如果用自备的重蒸水洗脱,OD 值会低于在 DNA 洗脱液 3.0 中测定的数字。
二:PCR 或其他酶反应回收
13. 直接在 PCR 或其他酶反应管中加 2 倍体积的通用溶胶液,振荡 10 秒混匀。如果 PCR 反应中使用了石蜡,需要预先去除。
14. 活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液,套上收集管后室温放置 2 分钟,然后 12,000 rpm 离心 2 分钟,倒弃穿透液,再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
15. 在上柱前,在反应液和溶胶液的混合液中加入相当于反应体积 1/2 的异丙醇(对 100uL 的反应液,加 50uL),快速振荡 10 秒混匀。
16. 直接进入上面胶回收操作的第 5 步并进行后面的操作。
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