SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒 产品及特点 本产品是基于 Topoisomerase 能够在几秒钟之内高速连接 DNA 片段的 原理开发的无背景克隆试剂盒,它使用了本公司通过定点突变改良的 TOPO 酶,连接效率比野生型更高。本试剂盒具有下列特点: 1. 高效快速,连接反应几乎在几秒钟内完成,连接率几乎达到 100%。 2. 适用于 pfu、KOD 等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆。 3. 无杂带或引物二聚体的PCR 扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。 4. 零背景,无需 IPTG-X-Gal 蓝白斑筛选,故不需要 IPTG-X-Gal 培养基。 5. 本试剂盒按 10 uL 标准反应体系,有 25 次和 50 次两种规格包装供选择。 6. 提供含 Amp 和 Kan 两种抗性的载体供选择(160684-25A/50A 是含 Amp 抗性 TOPO 载体,160684-25K/50K 是含 Kan 抗性 TOPO 载体)。 SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒 规格及成分 成 份 编 号 25 次热封袋包装 50 次热封袋包装 SuperTOPO-Amp Blunt 载体 160684-A 25 uL(其一) 50 uL(其一) SuperTOPO-Kan Blunt 载体 160684-K 25 uL(其一) 50 uL(其一) 连接缓冲液 160684B 25 uL 50 uL M13F 引物 50 uL 50 uL M13R 引物 50 uL 50 uL 超纯水 100935 1 mL 1 mL 使用手册 1 份 注意:160684-25A/50A 提供 SuperTOPO-Amp Blunt 载体, 160684-25K/50K 提供 SuperTOPO-Kan Blunt 载体。 SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。 自备试剂 DNA 插入片段、感受态细胞、SOB 或 LB 培养基(含抗菌素和不含的) 使用方法 1. 如果是 PCR 制备插入片段,所用引物不能磷酸化,使用 pfu、KOD 等产 生平末端片段的高保真 DNA 聚合酶。为保证扩增产物的完整性,PCR 循 环结束后,再延伸 5-10 分钟,确保片段延伸完全。 2. 电泳检测并相对定量 PCR 片段(跟 DNA marker 比较)。根据插入片段 长度和下表确定每次连接反应需要的用量: 3. 在一个干净的塑料离心管中,室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应 体系: 4. 轻柔吹打混匀后,短暂离心,常温(20-30℃)放置 0-5 分钟。如果在冬 天室温低于 20℃,建议使用 25℃水浴或金属浴。注意:连接时间超过 5 分钟的话连接效率会降低。 5. 如果当天不转化,可以将离心管放-20℃保存。如果转化,则取 5 uL 连 接液加到 50-100 uL 刚刚融化的感受态细胞中,轻柔混匀。注意:本产 品要求感受态细胞的转化效率不得低于 5 x 10E7cfu/ug。 6. 如果片段长度小于 2 Kb,则不需要冰浴和热激,直接在离心管中加入 500 uL 不含抗菌素的 SOC 或 LB 培养基,然后取 200 uL 涂盘。也可以先 3000g 离心 2 分钟后,弃掉大部分上清,只留约 100 uL 左右,然后重 悬细菌后全部涂盘在含 Amp(对 SuperTOPO-Amp)或 Kan(对 SuperTOPO-Kan)的培养皿上,37℃过夜培养。 7. 如果片段长度长于 2 Kb,则按常规转化方式,先冰浴 2-30 分钟,然后 42℃热激 30 秒,冰上防放置 2 分钟,再在离心管中加入 500 uL 不含 抗菌素的 SOC 或 LB 培养基,37℃ 250 rpm 培养 60 分钟,然后取 200 uL 涂盘。也可以先 3000g 离心 2 分钟后,弃掉大部分上清,只留约 100 uL 左右,然后重悬细菌后全部涂盘在含 Amp(对 SuperTOPO-Amp Blunt 载体)或 Kan(对 SuperTOPO-Kan Blunt 载体)的培养皿上, 37℃过夜培养。 8. 用 M13F/M13R 通用引物进行菌落 PCR 或直接测序来鉴定重组子。
上海康朗生物科技有限公司
联系商家时请提及chemicalbook,有助于交易顺利完成!
上海康朗生物