绿如蓝核酸染料(UV型)
产品及特点 目前最常见的替代 EB 的核酸染料 SYBR Green I(属于花氰类染料)虽然毒性比EB 低、灵敏度比 EB 高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBR Green I 在电泳过程中能在 DNA 分子间移位,很容易使 DNA 条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如 EB。所以在实际应用中依然不能有效替代 EB。本产品是同时具有 EB 稳定性和 SYBR Green I 低毒性的新性核酸染料,其特点如下:
1. 低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟 EB 相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟 EB 相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现 SYBR 染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于 PAGE。
6. 跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如 SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2 和 TBE 中背景低。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或 UV 光源,可以使用现成的观察 EB 的300nm UV。
8. 可用于 RNA 染色(也呈绿色)。
9. DNA 或 RNA 浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了 UV 对 DNA 的伤害,尤其适用于胶回收实验。
规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装
绿如蓝核酸染料(UV 型) LM70303 1.5 mL(棕色管)
使用手册 LM70303sc 1 份
运输及保存 常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂 电泳缓冲液和琼脂糖凝胶
使用方法 注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时好还是戴上塑料手套。
使用方法之一:电泳中染色 DNA (RNA 的染色跟 DNA 完全一样)。本方法是将本产品直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。
1. 将本产品直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每 100mL 凝胶加 3-10 uL 本产品,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如 EB 和 SYBR Green I,否则会相互干扰)。在 100mL 琼脂糖凝胶中加入本产品的量不要超过 10 uL,否则背景将很强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将 DNA 样品与 DNA 上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含 SDS 等去污剂的上样液,否则 SDS 会跟染料结合,极大地降低灵敏度。
3. 上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用基因五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品使用手册。
4. 电泳结束后在 300 nm 左右 的 UV 下观察。注意:不要使用波长为 260 nm 或360 nm 的 UV,否则检测灵敏度会降低。如果 DNA 或 RNA 浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免 UV 对 DNA 的伤害,尤其适用于胶回收实验。
注:显色结果:在紫外下,DNA 浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了 520-550 nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与 EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡 520-550 nm 的光)。如果能再加上能滤去 UV 的滤光片,效果会更好。
6. 后续 Southern、转膜或 DNA 胶回收实验按常规操作进行。
使用方法之二:电泳后染色 DNA本方法是在电泳后对 DNA 进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将本产品稀释 500 倍后(100 mL 水需要加 0.2 mL 本产品),将凝胶放入,室温下摇晃染色 30 分钟(对琼脂糖凝胶)或 15 分钟(对 PAGE)。
3. 用水脱色 10-30 分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。
注意:电泳后染色液可以反复使用次数。
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