TdT加尾法DNA探针地高辛标记试剂盒
原理及特点本产品是基于 TdT 末端转移酶能够在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的 原理而设计,该反应的示意图如下: 本产品是在上述原理的基础上开发的,具有下列特点:
1. 快速,15 分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链 DNA 和 DNA Oligo 标记,还可用于 3’突出的双链 DNA 标记,但后者标记效率稍低。
3. 可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高辛标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种 选择。
5. 同时提供非标记的 dATP,用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺 入比例。 6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度 RNA 检测)、小 RNA Northern、Southern Blot (不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。 规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装 TdT 缓冲液,5× 90605a 20 uL TdT 末端转移酶(10 U/uL) 90605b 10 uL dATP,2 mM 90605c 5 uL 标记核苷酸 见注 (A、B、C 不同,见注) 超纯水 100935 1 mL 使用手册 90605sc 1 份 注:A 型用于自选标记,用户需自备标记核苷酸,本产品不提供标记核苷 酸;B 型提供 5 uL Biotin-11-dUTP(CAT#:100920);C 型提供含 5 uL DIG-11-dUTP(CAT#:100921)。
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年
自备试剂 DNA 模板
使用方法 1. 在 0.2 mL 微量离心管中按下表设置一个 20 uL 体系的标记反应(如果需要标记更多探针,请增加标记体积而不要增加探针 DNA 的浓度): 成份 用量 探针 DNA 100-200 pmol TdT Buffer,5× 4 uL 标记核苷酸,1 mM (A 型需自备标记核苷酸) 1 uL dATP,2 mM (见下注) TdT 末端转移酶(10 U/uL) 2 uL 超纯水 补到 20 uL 注: dATP 可以不加,但这样得到的加尾全部是标记核苷酸,由于 DIG 或 biotin 的空间阻碍,这种探针的灵敏度不一定。如果不掺入 dATP 的探针杂交效果不好,在加尾反应时掺入一定比例的 dATP 到标记核苷酸中,以控制标记核苷酸的密度不至于太 高,这样可以提高比活。标记核苷酸和非标记的 dATP的具体比例为多少,可以自己优化。 2. 37℃反应 15 分钟,延长到 30 分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在,一般可以加尾 3-5 个 Biotin 或 DIG 标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长);如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸 dATP(其他dNTP 也可,只是本试剂盒只提供 dATP 而已),每条探针上可加上约 100个核苷酸,平均含 5 个标记核苷酸 3. 70℃ 10 分钟灭活 TdT 酶。 4. 如果需要,可以 PAGE 电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率,带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。 5. 如果是非同位素标记,探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针,请不要酚/氯仿抽提,因为非同位素标记物一般会使探针 DNA 进入有机相而丢失。
上海泽叶生物科技有限公司
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