SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
货号:PN1200
规格:25T/50T
保存:2-8℃,避光,有效期1年。
产品组成:
*使用前按每克PAGE胶凝固剂加蒸馏水10mL配置成10%溶液,并分装成小体积后冻存于-20℃。
*检测SDS溶液是否澄清,若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解,不影响效果。
产品说明:
本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需的全套试剂,客户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶) ,方便、快捷、实惠。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒约可配制25/50块常规大小的PAGE胶。
操作步骤(仅供参考):
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶浓度,凝胶浓度见附表1。
一、灌制分离胶(各试剂使用量见附表3)
1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr/Bis(29:1)、1.5mol/L Tris(pH8.8)、10%SDS和双蒸水在烧杯或试管中混合。
3、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层,使凝胶表面保持平整。)
5、静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
二、灌制浓缩胶(各试剂使用量见附表2)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、1.0mol/L Tris(pH6.8)、10%SDS和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
附表
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与分离范围
附表2. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶
附表3. 配制SDS-PAGE分离胶
注意事项:
1、10%PAGE胶凝固剂配制后分装-20℃保存。10%PAGE胶凝固剂溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20℃保存的PAGE胶凝固剂溶液。
2、10%SDS在低温情况下容易析出,配置之前请确保10%SDS溶液澄清透明。若有析出,可37℃水浴溶解后使用。
3、PAGE胶促凝剂易挥发,使用后请盖紧瓶盖。
4、PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及PAGE胶凝固剂、PAGE胶促凝剂的用量密切相关;在其它条件不变的情况下,可通过改变PAGE胶凝固剂及PAGE胶促凝剂的用量,控制PAGE凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作;附表中的PAGE胶凝固剂、PAGE胶促凝剂的用量可供参考,应根据实际操作情况做适当的调整。
5、在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
6、在分离胶上层加纯水时要小心操作,加水时速度不能太快。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶缓冲液
TRIS 三羟甲基氨基甲烷, Tris base 碱 sigma分装
HEPES N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸 Amresco
关键字: SDS-PAGE;蛋白凝胶;PAGE凝胶
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