大肠杆菌HB101化学感受态细胞
产品及特点HB101 菌株是 E.coli K12 菌株与 E.coli B 菌株的杂合产物（同时也是 Stbl3 的 原始菌株）。recA13 突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率； 但不含核酸酶 endA1 突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂 盒中去蛋白液。hsdS20 背景使 HB101 缺失内切酶系统，增强了外源 DNA 的稳定性 和提取质量。本产品是采用大肠杆菌 HB101 特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的化学转化。本产品具有以下特点：
1. 具有链霉素抗性。
2. 基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR) glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。
4. 该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验。
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
本产品 81221 0.1 mL×10
使用手册 81221sc 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以 根据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实 际情况加入适量的 DNA，通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 25 分钟。
3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟，晃动会降低转 化效率。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置 于 37℃摇床，200 rpm 振荡培养 60 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃倒置培养 12-16 小时。
注意事项：
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布 平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计 的克隆数较少，可通过离心（5,000 rpm，1 分钟）收菌后吸除部分培养液，悬浮 菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培 养。
4. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液 再涂布新培养基进行培养。
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