描述
酶联免疫分析技术(ELISA)广泛用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析,辣根过氧化物酶(HRP) 及其偶联物是 ELISA 技术常用的一种酶,能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基联苯胺(TMB)发生显色反应,从而进行定量或定性分析。由于 TMB 比其他显色底物具更高的灵敏度且无致癌性被广泛使用,TMB 主要用于 ELISA,免疫斑点杂交或免疫组化等实验,也有报道将其用于氯的检测分析。
通常 TMB 显色试剂由多个组分构成,必须在使用前进行配制,并且容易产生沉淀,使用相对不便且容易导致检测结果不稳定。本品采用全新的 TMB 显色技术,将所有相关试剂全部配在一个溶液,即仅由单一溶液组成,不仅简化了操作步骤,而且使检测结果更加稳定可靠。
本品专门为 ELISA 实验而设计。检测原理在于 HRP 或其他适当过氧化物酶能催化生成可溶的蓝色产物, 此时通常可在 370nm 测定吸光度。当显色反应被酸性溶液(如 0.5-2M H2SO4,0.5M HCl,1M H3PO4)终止后,产物由蓝色转为黄色,此时可在 450nm 测定吸光度。由于本品显色敏感度高,线性浓度范围较宽, 极其适合用于定量 ELISA 分析。
本品用于 ELISA 检测,每个样品通常使用 0.1ml 显色液,则 100ml 本品约检测 1000 个样品,500ml 本品约检测 5000 个样品。
使用方法 使用方法(ELISA) (1)使用之前,取出适量单组份 TMB 显色液,使其回到室温再开始使用; (2)参考 ELISA 检测试剂盒的实验步骤,当与 HRP 标记抗体孵育一段时间后,用适当洗涤液洗涤 3-5 次, 每次 3-5min。 (3)洗涤完毕后,去除洗涤液,加入 100μl 单组份 TMB 显色液。 (4)室温避光孵育 5-30min 或更长时间(可长达 24h),直至显色到预期深浅。【注意】:建议根据实验需求选择试剂用量、显色时间和反应温度。 (5)直接在 370nm 测定吸光度。或者加入 100μl 0.5-2M H2SO4 终止反应,随后在 450nm 测定吸光度。
储存/保存方法 2-8℃避光保存,有效期24个月 注意事项 1、本品含TMB和H2O2,对人体有刺激性,请注意防护。 2、如发现本品出现浑浊或颜色变为蓝色,请停止使用。 3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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