Gel-Green (EB升级换代产品, 10000X)

Gel-Green (EB升级换代产品, 10000X)

信裕生物的Gel-Green(凝胶绿)核酸染料是一种EB (Ethidium bromide，溴化乙锭)的升级换代产品，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。Gel-Green具有安全(未检测到致突变性和细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品后经约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光)激发呈现绿色荧光，适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统。
由于Gel-Green在500nm左右处有的激发波长，可以使用对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪进行核酸检测，从而避免常规的紫外检测对核酸样品的致突变性，以及紫外对人的眼睛和皮肤的伤害。特别在切胶回收时，使用Gel-Green并用蓝光灯具有很大的优势，不仅可以避免核酸样品的突变，也可以避免紫外光对人体的伤害。
Gel-Green比EB或SYBR Green更安全。Gel-Green在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，即使在S9代谢活化时，也没有检测到致突变性。Gel-Green和信裕生物另外一种安全型核酸染料Gel-Red，由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。艾姆斯氏试验结果表明，Gel-Green比Gel-Red更安全，即便在S9代谢活化时，当Gel-Green浓度高达约20微克/毫升时，也没有检测到致突变性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA。并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。
Gel-Green检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。Gel-Green的检测灵敏度比EB高8-10倍，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，Gel-Green和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，Gel-Green预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸染色效果差，而Gel-Green对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。本说明书推荐使用的Gel-Green浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高Gel-Green的工作浓度。
Gel-Green的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而Gel-Green的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。Gel-Green的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含Gel-Green的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
Gel-Green可以使用和SYBR Green或EB相同的检测体系。Gel-Green具有和SYBR Green或SYBR Gold几乎相同的光学性质，两者的激发光和发射光都非常接近，这样可以直接用Gel-Green替换SYBR Green，以使用SYBR Green的凝胶观察、拍照或成像系统(约500nm激发)。对于原来用于EB染料观察的系统，可以考虑选用信裕生物的替代Gel-Red染料来替代EB，但也可以使用没有致突变性的Gel-Green来替代EB。使用Gel-Green来替代EB，并且用EB的紫外检测体系时，检测灵敏度会比使用Gel-Red低约4-5倍。对于既可以观察EB也可以观察SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统，则推荐直接用Gel-Green来替换EB。Gel-Green的激发光谱和发射光谱请参考图1。

图1. Gel-Green的激发光谱和发射光谱

Gel-Green的使用方法和EB一致。Gel-Green可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更加高一些。但由于Gel-Green本身已经非常灵敏，通常采用把Gel-Green直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊的情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
Gel-Green对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。
通过凝胶回收试剂盒(如信裕生物或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的Gel-Green，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。
使用说明：
Gel-Green和EB(溴化乙锭)一样可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种： 
1. 琼脂糖凝胶中添加Gel-Green。
根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时，按照每100毫升胶液加入10微升Gel-Green的比例(10000:1)加入Gel-Green。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的DNA或RNA在该胶中电泳后，用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)，就可以观察到明亮的核酸条带。说明：Gel-Green非常稳定，所以Gel-Green可以像EB一样在琼脂糖凝胶液加热融解后但未凝固前加入并混匀，也可以在琼脂糖融解前加入然后再微波炉加热融解并混匀。
2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色。
按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入20-40微升Gel-Green的比例(2500-5000:1)加入Gel-Green，配制成Gel-Green染色液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中，加入适量上述配制好的Gel-Green染色液，确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色20-30分钟。染色的时间根据胶的厚度而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后，在紫外灯下即可观察DNA条带。要观察到更为清晰的条带，可以在染色后用水漂洗1-2次，每次3-5分钟，以消除背景，然后用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)。Gel-Green染色液可以重复使用3次左右。Gel-Green染色液也可以一次大量制备，在室温下避光保存，直至用完。对于核酸需要回收的情况，操作过程中需要注意避免核酸酶污染。