"DU145 Cell:人前列腺癌细胞系
细胞形态:上皮细胞样
细胞生长:贴壁
细胞背景资料:DU 145 是从一位有3年淋巴细胞白血病史的前列腺癌患者的脑部转移灶中建立的。该细胞系未检测到激素敏感性,酸性酶阳性,单个的细胞可在软琼脂中形成集落。对此细胞和原始肿瘤的亚显微结构分析可见微绒毛、微丝、细胞桥粒、线粒体、发达的高尔基体和异质溶酶体。该细胞不表达前列腺抗原。
SKNF1细胞系相关产品:HAC-84细胞、SNU638细胞、AtT-20细胞
SKNEP-1细胞系相关产品:HuLEC-5a细胞、KM-12细胞、786-O细胞
HS0578T细胞系相关产品:L cells (TK-)细胞、TK 10细胞、MGc80-3细胞
HEK-293 c18细胞系相关产品:brain-derived Endothelial cells.3细胞、Caki2细胞、GES-1细胞
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
DU145 Cell:人前列腺癌细胞系
细胞传代时消化的问题:可以这样说,对于需要消化传代的细胞,每一次的消化都是对这个细胞存活与否,状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题,自己养的细胞开始的几代长的还挺好的,可是穿过几代之后就发现自己的细胞,状态越来越差劲了。对于这个问题,可以非常肯定地说,你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以,越长越差。在消化的过程中,你加入胰酶后,所有细胞都在被胰酶消化着,但是我们忽视了一个问题就是,细胞的生长状态是不一样的,每一个细胞的贴壁情况也是不一样的,有的贴壁牢固,有的贴壁没有那么牢固的,所以,让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的,他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。(以难消化细胞为例);具体操作:1)首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(你可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。)3)吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(你也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比。)这是第三步。4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。这是第四步。其实还可以有第五步,对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话,你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,没办法,你必须分多批多次消化,这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低,保证细胞的状态能够。当然了,如果细胞是属于那种很容易消化的细胞,像RAW264.7,仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较,去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步,除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外,还有一个更重要的作用就是,可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态,不成片不连体。
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
L5178-R细胞系相关产品:Karpas-299细胞、GM3190细胞、P3X63-Ag8.653细胞
CNE-2细胞系相关产品:HCT15细胞、RMC-1细胞、MDA-330细胞
RASMCs细胞系相关产品:U2932细胞、JIMT1细胞、SKNBE2C细胞
CCD-1095Sk细胞系相关产品:SCC 9细胞、hFOB 1.19细胞、HCO细胞
MIHA细胞系相关产品:HCS-2/8细胞、NPC-039细胞、PaTu8988s细胞
细胞生长特性:贴壁
DU145 Cell:人前列腺癌细胞系
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。
细胞形态特性:上皮细胞样
C3H/10T1/2细胞系相关产品:JIMT-1细胞、SF763细胞、RTMC细胞
HCC-1806细胞系相关产品:D324 Med细胞、RBL 2H3细胞、HCS2/8细胞
VM-CUB-1细胞系相关产品:BT-483细胞、SF-126细胞、AU565细胞
Giant Cell Tumor细胞系相关产品:L- cell细胞、NCI-H69细胞、E.L.4细胞
SU-DH-L5细胞系相关产品:PC 61细胞、RetroPack PT67细胞、EBTr细胞
HEL-92细胞系相关产品:Hs 737.T细胞、NCIH1184细胞、PT-K75细胞
SF-763细胞系相关产品:CCRF SB细胞、RH8994细胞、L cell line细胞
DU145 Cell:人前列腺癌细胞系
A2780S细胞系相关产品:OE-33细胞、3T3 clone A31细胞、WSU-DLCL2细胞
SKG-3a细胞系相关产品:TALL1细胞、NIT-1细胞、Hs 604.T细胞
H-1435细胞系相关产品:YD15细胞、H-2135细胞、OCI/AML2细胞
UT7细胞系相关产品:MEG01细胞、TE-671细胞、T/GHA-VSMC细胞
LoMeT-ccRcc细胞系相关产品:RASMCs细胞、EoL-1细胞、OVCAR.5细胞
CAL 148细胞系相关产品:TPC-1细胞、SNK-1细胞、HRA-19细胞
SNK-1细胞系相关产品:CCD 966SK细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-453细胞、H-2085细胞
EOC20细胞系相关产品:COV-434细胞、AgC11x3A细胞、Madin-Darby Canine Kidney细胞
NALM-6细胞系相关产品:RCCJF细胞、NIH:OVCAR3细胞、MCF.7细胞
KYSE-70细胞系相关产品:HEK/293细胞、NCI-H82细胞、Nthy-ori 3.1细胞
AD-293细胞系相关产品:C4-2 Bone metastatic细胞、KYSE 150 KYSE150 Kyse150 KY150
细胞、Hs 888Lu细胞
RGC-6细胞系相关产品:RPMI7666细胞、RKO-AS45-1细胞、RCC10 RGB细胞
NCI-A549细胞系相关产品:M14-MEL细胞、AdHek细胞、U266 Bl细胞
E0771细胞系相关产品:Human Corneal Epithelial cells-Transformed细胞、BC-3-H-I细胞、kms 11细胞
NOZAWA细胞系相关产品:ME180细胞、NCI-SNU-878细胞、HepaRG细胞
SL1细胞系相关产品:Cates-1B细胞、NCI-H2347细胞、TFK1细胞
IPLB-Sf21AE细胞系相关产品:NCI-H378细胞、NCI-SNU-520细胞、hFOB细胞
U20-S细胞系相关产品:MCF-12F细胞、OPM-2细胞、HuT-102细胞
D283 Med细胞系相关产品:253JB-V细胞、L 428细胞、BC3H1细胞
OVCAR.8细胞系相关产品:H-446细胞、HCM细胞、IPLB-Sf21AE细胞
HCV 29细胞系相关产品:Ly19细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞、OSRC2细胞
Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma细胞系相关产品:U251细胞、SNU1040细胞、MLFC细胞
DMS-79细胞系相关产品:U031细胞、AM38细胞、UMUC1细胞
Kasumi-6细胞系相关产品:WEHI-3B细胞、HS578细胞、OVCA 420细胞
NCTC1469细胞系相关产品:SkChA1细胞、RL952细胞、Madison 109细胞
SW-948细胞系相关产品:SW 1573细胞、CL-34细胞、SKG-3a细胞
NCI-SNU-1细胞系相关产品:HCC-78细胞、MGSMC细胞、MH7A细胞
HA细胞系相关产品:HOS/MNNG细胞、UCW 100细胞、SCC VII细胞
A-101D细胞系相关产品:OCI/AML-3细胞、FRTL-5 Cl 2细胞、TE-15细胞
GC9811-P细胞系相关产品:Anip973细胞、HNE-3细胞、BE2_C细胞
RPMI-6666细胞系相关产品:SKG3A细胞、MC-116细胞、Madin-Darby Bovine Kidney细胞
RIN-14B细胞系相关产品:Uhth-74细胞、TE11细胞、TE10细胞
NCIH1651细胞系相关产品:KG-1细胞、HuT 78细胞、NCIH1792细胞
NFS-60细胞系相关产品:Hs-600-T细胞、MeSoTheliOma-211H细胞、293 H细胞
A-9细胞系相关产品:LAD 2细胞、IOSE 29细胞、ETCC-007细胞
RERF-LCMS细胞系相关产品:NCI-H1882细胞、MAntle cell VERona-1细胞、BLO-11细胞
NCI-H847细胞系相关产品:Namalwa细胞、NCI-H-128细胞、IPLB-SF 21AE细胞
KM-H2细胞系相关产品:HMC-1细胞、CaSki细胞、KP-2细胞
MDA-330细胞系相关产品:SPC-A-1细胞、H87细胞、10RGB细胞
HTR8svn细胞系相关产品:HCC-9204细胞、Panc3_27细胞、HT-144细胞
NCI-H2073细胞系相关产品:Gerner 7666细胞、HS-68细胞、B35细胞
HEK.EBNA细胞系相关产品:NCIH2196细胞、WM115F细胞、NCIH226细胞
NCI-841细胞系相关产品:AML-2细胞、Rat1细胞、LS180细胞
DU145 Cell:人前列腺癌细胞系
NMCG1细胞系相关产品:HBVSMC细胞、SaOS-2细胞、HEK-EBNA细胞
LCLC103H细胞系相关产品:CHO-S细胞、OAC-P4C细胞、MDA-MB-134细胞
NCI-H2196细胞系相关产品:MA-104细胞、6-10B细胞、H-1915细胞
HS 683T细胞系相关产品:NCI-H522细胞、U266细胞、3T3-Swiss细胞
Mahlavu细胞系相关产品:Sp2/0-Ag14细胞、MB468细胞、HO-1-N-1细胞
GM06141细胞系相关产品:RBL-I细胞、THP 1细胞、NCI N87细胞
MCF.7细胞系相关产品:SKNEP1细胞、HCEC细胞、AGS细胞
THLE-2细胞系相关产品:TALL-1 [Human adult T-ALL]细胞、EBC-1细胞、NPC-TW039细胞
PTK 2细胞系相关产品:COLO 699细胞、NS1-Ag4/1细胞、hCMEC/D3细胞
Hep2细胞系相关产品:H-660细胞、hFOB1.19细胞、LICR-LON-HN6-R细胞
HT1080细胞系相关产品:PK-13细胞、PANC.1细胞、OS-732细胞
NCIH2122细胞系相关产品:LN-382细胞、PaTu8988s细胞、NCI-H322细胞
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