Alexa Fluor 488/PI细胞凋亡检测试剂盒
中文名称:Alexa Fluor 488/PI细胞凋亡检测试剂盒
英文名称:Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
产品规格:50次
本试剂盒是一种采用Annexin V-Alexa Fluor 488与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性,对PS有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶不能通过完整的活细胞,但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色, 因此通常将Annexin V与PI配合染色, 以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。 试剂盒组成:
注意事项: 1、消化细胞时不能用含EDTA的胰酶。 2、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。 3、需自备PBS和去离子水。 4、荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 5、PI对人体有刺激性,请注意适当防护。 6、请穿实验服并戴一次性手套操作。 操作步骤: 1、细胞样品的准备: a.对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50μl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。 b.对于悬浮细胞:1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50微升左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μl左右的PBS,以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。 2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去离子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新悬浮细胞,调节其浓度为 1×106/ml。 4、取 100μl的细胞悬液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。 6、在反应管中加 400μl PBS,流式细胞仪(FACS)分析。 实验图例: Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI双染流式分析图谱 储存条件:2~8℃,避光保存
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