Annexin V-EGFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒
中文名称:Annexin V-EGFP/PI双染细胞凋亡检测试剂盒
英文名称:Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
产品规格:10T|20T|50T|100T
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。与FITC 的绿色荧光信号相比,EGFP 的绿色荧光信号具有信号强,不易淬灭,稳定性高等优点,故本试剂盒采用EGFP作为荧光标记探针。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。 3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。 4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,不推荐用于检测组织样本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节
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