"WISH epithelioid cells人羊膜细胞系 细胞背景资料:最初以为这株细胞的起源是正常羊膜,但随后通过同工酶分析、HeLa标记染色体和DNA指纹法分析,证实该细胞是HeLa细胞污染的;角蛋白阳性。 细胞形态:上皮细胞样 细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。 TCMK1细胞系相关产品:CMT.64细胞、OCI Ly1细胞、H-23细胞 Sf-21细胞系相关产品:KAT5细胞、MiaPaca.2细胞、PC10细胞 B16 melanoma F10细胞系相关产品:NCIH69细胞、OKT3细胞、EFO-27细胞 细胞生长:贴壁 WISH epithelioid cells人羊膜细胞系 细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源 细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支) 血清必须贮存于–20~-70℃,若存放于4℃,请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶,可将40~45ml分装于无菌50ml离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。勿将血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏,而影响血清之品质。血清凝絮物:发生之原因有许多种,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin) 造成,这些凝絮沈淀物不会影响血清本身之品质。若欲减少这些凝絮沈淀物,可用离心3000rpm,5min去除,或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沈淀物,因为会阻塞过滤膜。显微镜下观察之“小黑点”:通常经过热处理之血清,沈淀物的形成会显著的增多。有些沈淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为血清遭受污染,而将血清放在37℃中欲培养此“微生物”,但在37℃环境下,又会使此沈淀物增多,更会误认为微生物之增殖,但以培养细菌之培养基检测,又没有污染。一般而言,此小黑点应不会影响细胞之生长,但若怀疑此血清之品质,应立即停用,更换另一批号的血清。 细胞传代方法:1:2-1:4传代,每周2-3次。 CL1-0细胞系相关产品:MD Anderson-Metastatic Breast-231细胞、NCIADR.RES细胞、PK(15)细胞 Med 283细胞系相关产品:MeT5A细胞、CHO-Lec1细胞、MS751细胞 EBTr细胞系相关产品:RWPE2细胞、SNU869细胞、TSU-Pr1细胞 PG-4 (S+L-)细胞系相关产品:SB细胞、MCF7细胞、COC1/CDDP细胞 RCC-4细胞系相关产品:A549细胞、KPL1细胞、COLO 320 HSR细胞 细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 WISH epithelioid cells人羊膜细胞系 细胞生长特性:贴壁生长 细胞形态特性:上皮细胞样 细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。 LS-411细胞系相关产品:H1693细胞、MC3T3-E1 Subclone 14细胞、OVCA433_Bast细胞 MDA MB 175 VII细胞系相关产品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞、H-1623细胞、TO 175.T细胞 IPLB-SF-21-AE细胞系相关产品:SKMEL24细胞、SCC154细胞、JC细胞 NCI-H1838细胞系相关产品:A3细胞、Strain V细胞、B16细胞 CEM-CCRF (CAMR)细胞系相关产品:H-358细胞、SKM-1细胞、Epstein-Barr-3细胞 LCD细胞系相关产品:NCI-SNU-520细胞、ISHI细胞、GM12878细胞 UPCI-SCC-90细胞系相关产品:OCI AML4细胞、SU-DHL-10细胞、HCCC-9810细胞 H-157细胞系相关产品:U266 B1细胞、NCI-H1876细胞、Panc10.05细胞 EBNA293细胞系相关产品:HSC-I细胞、OV-1063细胞、MiaPaCa2细胞 NH6细胞系相关产品:MonoMac6细胞、WERI细胞、HDQ-P1细胞 WISH epithelioid cells人羊膜细胞系 H1048细胞系相关产品:IGROV1细胞、HT55细胞、NL20细胞 TE 32细胞系相关产品:Pro-5 Lec1.3c细胞、T-ALL 1细胞、NCI-H23细胞 SW 1222细胞系相关产品:H-2029细胞、T. T细胞、CAL 51细胞 H-719细胞系相关产品:Caki2细胞、H1155细胞、HuT 102细胞 GES1细胞系相关产品:HEK293FT细胞、Hs832.Tc细胞、MG-HU-3细胞 OCI-Ly1细胞系相关产品:THPI细胞、Mahlavu细胞、HCC1500细胞 OCI-Ly1细胞系相关产品:THPI细胞、Mahlavu细胞、HCC1500细胞 NCIH23细胞系相关产品:mIMCD-3细胞、SUPM2细胞、U-118-MG细胞 huH 1细胞系相关产品:Lewis lung carcinoma细胞、D283 Med细胞、343MG细胞 RK 13细胞系相关产品:NCIH2405细胞、HNE3细胞、SNU601细胞 LNCaP-ATCC细胞系相关产品:MLA 144细胞、Japanese Tissue Culture-28细胞、P3HRI细胞 Hs1.Tes细胞系相关产品:hCMEC/D3细胞、UT7细胞、RPTEC/TERT 1细胞 U-251MG细胞系相关产品:SW1116细胞、EC-GI-10细胞、P 3 HR 1细胞 OS-RC-2细胞系相关产品:NUGC2细胞、SF-767细胞、3T6细胞 SK MES 1细胞系相关产品:OVCAR.3细胞、D-283MED细胞、LNCaP C4-2细胞 HGF-1细胞系相关产品:PAN 02细胞、SNU-869细胞、JIMT-1细胞 CORL279细胞系相关产品:MILE SVEN1细胞、SR细胞、U87 MG细胞 HS-729细胞系相关产品:Murine Long bone Osteocyte-Y4细胞、SKNMC细胞、RPMI 6666细胞 B5537SKIN细胞系相关产品:MLTC-1细胞、HT 29细胞、OVCAR-3细胞 NRK49F细胞系相关产品:SN4741细胞、GM04678细胞、3T3-L1 ad细胞 HREC细胞系相关产品:H-1672细胞、J.E6-1细胞、PLC-PRF-5细胞 NCI-H2135细胞系相关产品:DV90细胞、TGBC11T细胞、ISHI细胞 Vero 76细胞系相关产品:SK-N-BE(1)细胞、HM细胞、PG-4 S+L-细胞 P-388细胞系相关产品:ACC-3细胞、SKNBE2细胞、HLF细胞 Ramos (RA 1)细胞系相关产品:hESC细胞、K7M2 wt细胞、SW-1990细胞 SK-NSH细胞系相关产品:COV-362细胞、HCC 38细胞、C4-1细胞 HSMC细胞系相关产品:NCI-HUT-596细胞、Kasumi-1细胞、NCI-SNU-C2A细胞 FRTL-5细胞系相关产品:Hs-675-T细胞、P3X63Ag8.653细胞、SO-RB50细胞 HANK1细胞系相关产品:MCA-38细胞、H-1781细胞、NCI-H322细胞 K422细胞系相关产品:N2a细胞、DHL-8细胞、Chang Cells细胞 MCF12F细胞系相关产品:hs 68细胞、MGc80-3细胞、TM4细胞 MC38细胞系相关产品:QG56细胞、H-1238细胞、OCM1A细胞 C3A细胞系相关产品:TCC-SUP细胞、GAK细胞、CII细胞 H1770细胞系相关产品:H-209细胞、HuH1细胞、Ku812细胞 BEL7402细胞系相关产品:Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS细胞、2PK3细胞、Potorous tridactylus Kidney 2细胞 BLO11细胞系相关产品:H508细胞、H522细胞、C918细胞 L 929细胞系相关产品:SUNE-1细胞、HPAF-II/CD18细胞、H711细胞 MuM-2B细胞系相关产品:MNNG细胞、KYSE 70细胞、CL34细胞 MuM-2B细胞系相关产品:MNNG细胞、KYSE 70细胞、CL34细胞 T-ALL 1细胞系相关产品:ZR75-30细胞、NUGC-3细胞、OCI-Ly 19细胞 H2347细胞系相关产品:ChaGo-K1细胞、P388细胞、Centre Antoine Lacassagne-148细胞 MARC145细胞系相关产品:FRH-0201细胞、IPLB-SF-21-AE细胞、HCC2157细胞 UPCI:SCC090细胞系相关产品:alpha-TC1.6细胞、HP615细胞、EFM-19细胞 T_T_细胞系相关产品:BN-CL2细胞、NCIH82细胞、LP1细胞 H727细胞系相关产品:OCM-1细胞、A2780/CP70细胞、NCI-H358细胞 HT-29细胞系相关产品:HS578细胞、HBL-1 [Human diffuse large B-cell lymphoma]细胞、HcerEpic细胞 CNLMG-B5537SKIN细胞系相关产品:UPCI:SCC90细胞、L 540细胞、SK-N-BE2细胞 SNU16细胞系相关产品:CAL39细胞、FL 62891细胞、RIN14B细胞 HCe-8693细胞系相关产品:MOLM-16细胞、UACC893细胞、OCIAML5细胞 H-9细胞系相关产品:NCI-H1648细胞、NALM6细胞、H4IIE细胞 CCD 966SK细胞系相关产品:MS 751细胞、DHL8细胞、TGBC11TKB细胞 WISH epithelioid cells人羊膜细胞系 HuH28细胞系相关产品:IHH4细胞、LS 513细胞、PTK-2细胞 639V细胞系相关产品:Hs695T细胞、201T细胞、EAhy 926细胞 LS 180细胞系相关产品:HT-1080细胞、L 929细胞、JTC-28细胞 IPLB-Sf21AE细胞系相关产品:NCI-H378细胞、HRA-19细胞、NS1-Ag4/1细胞 "
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