PA317 epithelioid cells逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系

"PA317 epithelioid cells逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
细胞背景资料：胚胎；成纤维细胞；NIH Swiss
细胞形态：上皮细胞样
正确的细胞复苏需知事项：细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢？没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢？细胞活力和形态检查的作用何在？活力检查——千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查——检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液——在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至７０%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根据不同的细胞类型调整)；冻存液——用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择最合适的冻存液(常用的冻存液成分有)：５-１０% DMSO——注意确保DMSO不含有其他的毒性物质；５-１５%甘油；如果细胞在无血清培养基内生长，应在５０%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长２４小时)内冻存和复苏。在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过１.５ml。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以最快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的！还有一个最重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题！细胞正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要；其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做好防冻工作，戴上护目镜；尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。
CCC-HIE-2细胞系相关产品：HEK293EBNA细胞、293 H细胞、Gejiu Lung Carcinoma-82细胞
MOVAS-1细胞系相关产品：Human Liver-7702细胞、NCI-H460细胞、WM266细胞
CL-11细胞系相关产品：University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1细胞、MGH-U3 (RN)细胞、RC13细胞
细胞生长：贴壁
PA317 epithelioid cells逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培养基；包含１０%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%甘油的新鲜培养基或５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：５０%细胞条件无血清培养基和５０%包含有７.５%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有７.５%二甲基亚砜和１０%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约２００～４００g离心５分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以１×１０(７)到５×１０(７)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约２００g离心５分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以５×１０(６)到１×１０(６)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
WM 239-A细胞系相关产品：BCP1细胞、H-2106细胞、TE353.SK细胞
QBC-939细胞系相关产品：RC13细胞、TSUpr1细胞、P31/Fujioka细胞
RBE4细胞系相关产品：B95-8细胞、MCF-12F细胞、NCIH522细胞
ssMCF-7细胞系相关产品：NCI-SNU-C1细胞、NCI.H522细胞、AZ 521细胞
PC615.3细胞系相关产品：HCC827细胞、LIM1215细胞、BEL7402细胞
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
PA317 epithelioid cells逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
细胞生长特性：贴壁
细胞形态特性：详见细胞说明书
常见细胞培养中一些问题总结：１)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为５%-１５%，不要低于５%或高过２０%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为１０%，可以适量加减；２)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；３)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；４)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；５)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；６)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
Colo699细胞系相关产品：H-2330细胞、H-661细胞、HCT116/L细胞
TM-4细胞系相关产品：OAC-P4C细胞、HEC-1-B细胞、CCD966SK细胞
SUM 159PT细胞系相关产品：GM02132细胞、TE-5细胞、P3-X63Ag8.653细胞
CAL 12T细胞系相关产品：HOS-TE85细胞、SW-1990细胞、MES-SA/Dx-5细胞
HCT 116细胞系相关产品：H1694细胞、MOLT-16细胞、Metastatic Variant-522细胞
HTh 74细胞系相关产品：MDA-MB-415细胞、GM00637细胞、IOSE-Mar细胞
NK-10A细胞系相关产品：X63细胞、EFO 27细胞、LL/2(LLc1)细胞
H520细胞系相关产品：EoL-1 cell细胞、NCIH660细胞、MLA-144细胞
NCIN87细胞系相关产品：H1876细胞、NCIH841细胞、NCI-H2405细胞
NCI.H226细胞系相关产品：HEC1-B细胞、5-8F细胞、NCI H508细胞
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COLO320/DM细胞系相关产品：Pro-Lec1.3C细胞、Jurkat-FHCRC细胞、GOTO细胞
H295细胞系相关产品：T173细胞、CMK细胞、KRCY细胞
HEK 293-EBNA细胞系相关产品：HIT clone T15细胞、NCIH211细胞、SUM-52-PE细胞
LS 1034细胞系相关产品：MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)细胞、LY细胞、OVCA 433细胞
BT-325细胞系相关产品：SNU601细胞、Merwin Plasma Cell tumor-11细胞、NCI-H87细胞
639V细胞系相关产品：Hs695T细胞、OPM2细胞、SUDHL-4细胞
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USMC细胞系相关产品：UT7细胞、Hs 840.T细胞、HEK-293-F细胞
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Colo-201细胞系相关产品：NK-92 MI细胞、BEL 7404细胞、Ha Fe细胞
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NCI-H196细胞系相关产品：NIE-115细胞、Centre Antoine Lacassagne-12T细胞、L615细胞
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3T3 Swiss Albino细胞系相关产品：OVTOKO细胞、BNL CL2细胞、CCK81细胞
LAN1细胞系相关产品：HCE细胞、SKG-IIIa细胞、Mac-1细胞
AAV-293细胞系相关产品：P19细胞、A1847细胞、HECV细胞
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NCIH23细胞系相关产品：mIMCD-3细胞、SUPM2细胞、U-118-MG细胞
SMMC-7721细胞系相关产品：CCD841CoN细胞、NCIH1651细胞、L Wnt-3A细胞
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Centre Antoine Lacassagne-78细胞系相关产品：H-548细胞、LNT-229细胞、NTERA2-cloneD1细胞
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Li-7细胞系相关产品：NCTC clone 929细胞、Balb/3T3-4-Cl31细胞、VM-CUB-I细胞
TF-1a细胞系相关产品：Karpas299细胞、KYSE-140细胞、S37细胞
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SW-1990细胞系相关产品：H-2342细胞、NB19-RIKEN细胞、SKNEP细胞
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HuH28细胞系相关产品：IHH4细胞、LS 513细胞、PTK-2细胞
IGR-OV1细胞系相关产品：H1734细胞、EMT6细胞、MFD-1细胞
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H-28细胞系相关产品：NCIH2126细胞、NCI-H2228细胞、UACC-812细胞
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LM2-4175细胞系相关产品：Spodoptera frugiperda clone 9细胞、MHCC97细胞、T-98G细胞
C22 (Clara)细胞系相关产品：EFM-192C细胞、HCC1833细胞、NCI/ADRRES细胞
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PATU-S细胞系相关产品：SHZ-88细胞、NCI-460细胞、SW620细胞
PA317 epithelioid cells逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
PLA-802细胞系相关产品：BC-025细胞、H1930细胞、SK-ChA1细胞
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SUM 159PT细胞系相关产品：GM02132细胞、OCILY10细胞、NCIH1563细胞
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