"NCI-H1672 epithelioid cells人小细胞肺癌细胞系 细胞背景资料:小细胞肺癌;男性 细胞形态:上皮细胞样 细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。 CLONE M3细胞系相关产品:P3-X63-Ag 8.653细胞、A3细胞、HPAF-II细胞 Vero E-6细胞系相关产品:OCI-AML4细胞、T84细胞、Walker/LLC-WRC 256细胞 H1755细胞系相关产品:Panc_04_03细胞、ME180细胞、MDAPCa-2b细胞 细胞生长:贴壁 NCI-H1672 epithelioid cells人小细胞肺癌细胞系 细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源 细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支) 细胞的冻存:为避免污染造成的损失,最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前,细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培养基;包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基;50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基或50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基,一些普通的培养基成分可能是:50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存:计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到最小体积,不要搅乱细胞。以1×10(7)到5×10(7)细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在无血清培养基中,再次悬浮细胞。分装进冻存管,将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存:使用分离试剂从基层分离细胞,分离时尽可能温和,使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中,再次悬浮分离细胞,确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积,不要搅乱细胞。以5×10(6)到1×10(6)细胞/ml密度,在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管,将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。 细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。 NCIH1781细胞系相关产品:Jijoye细胞、NRK52E细胞、Sarcoma OSteogenic-2细胞 Human Corneal Epithelial cells-Transformed细胞系相关产品:NCIH1755细胞、NCI H69细胞、WEHI-3B细胞 RT4-D6P2T细胞系相关产品:Jiyoye(P-2003)细胞、IAR 20细胞、QSG-7701细胞 HL-7702细胞系相关产品:Ly3细胞、H508细胞、BPH1细胞 SW 527细胞系相关产品:UMUC-3细胞、H1435细胞、A375-S2细胞 细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 NCI-H1672 epithelioid cells人小细胞肺癌细胞系 细胞生长特性:贴壁 细胞形态特性:详见细胞说明书 细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。 U-138 MG细胞系相关产品:NCIH196细胞、A549/DDP细胞、VMRCRCZ细胞 NUGC-3细胞系相关产品:H-735细胞、MOLT 16细胞、HTR-8/SV neo细胞 K299细胞系相关产品:CL34细胞、H-2347细胞、NK-92细胞 PLB985细胞系相关产品:Pro-5WgaRI3C细胞、P30-OHKUBO细胞、Panc-05.04细胞 MNNGHOS细胞系相关产品:BIC1细胞、V 79细胞、H28细胞 NCIH508细胞系相关产品:UACC893细胞、SUM-52PE细胞、Evsa T细胞 Hs729细胞系相关产品:Panc 08.13细胞、HONE1细胞、MC3T3-E细胞 H-2405细胞系相关产品:Lu-99A细胞、WiDr细胞、WM115F细胞 IFRS1细胞系相关产品:SNU-423细胞、GM06141细胞、TE13细胞 MDA MB231细胞系相关产品:GS-9L细胞、T-ALL1细胞、KMST-6细胞 NCI-H1672 epithelioid cells人小细胞肺癌细胞系 KU-19-19细胞系相关产品:MM1.S细胞、SK-NEP-1细胞、HT细胞 CHL1细胞系相关产品:MBMEC细胞、NCI-H220细胞、MDA157细胞 RLE-6TN细胞系相关产品:C3H10T1/2CL8细胞、U-251MG细胞、RWPE-1细胞 E6-1细胞系相关产品:FRhK-4细胞、293 c18细胞、143 B细胞 THPI细胞系相关产品:SK-N-BE(2C)细胞、NBL-12细胞、HS940细胞 LCD细胞系相关产品:NCI-SNU-520细胞、ISHI细胞、GM12878细胞 HT 1080细胞系相关产品:KG1A细胞、SKNBE(2)细胞、RMG-1细胞 MKN45细胞系相关产品:TE-671细胞、MCMEC细胞、SVG(P12)细胞 RL细胞系相关产品:SCC90细胞、NCIH596细胞、C22细胞 MES 13细胞系相关产品:MCA38细胞、HLEB-3细胞、SUM 149PT细胞 L cells细胞系相关产品:HMC3细胞、M619细胞、MKN 28细胞 U266B1细胞系相关产品:OV433细胞、EO771细胞、OV1063细胞 SW1463细胞系相关产品:H69细胞、SF539细胞、TE1细胞 LN299细胞系相关产品:Rat1细胞、ROS 17/28细胞、EB-1细胞 HD11细胞系相关产品:GM05887细胞、RPMI-6666细胞、SKNDZ细胞 A375细胞系相关产品:LOUNH91细胞、NTC-200细胞、Lewis Lung Cancer细胞 SW527细胞系相关产品:R3/1细胞、P3/NS-1细胞、RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]细胞 H184A1细胞系相关产品:28SC细胞、Baby Hamster Kidney 21细胞、Hs888 Lu细胞 TEV-1细胞系相关产品:4175细胞、Pan02细胞、Normal fibroblast-10细胞 HMCB细胞系相关产品:Madin-Darby Bovine Kidney细胞、MDCKII-WT细胞、NPC-TW 01细胞 SU-DHL1细胞系相关产品:Hs695细胞、HEC1B细胞、Mono-Mac-6细胞 HT144细胞系相关产品:PCI-4.2细胞、COLO829细胞、HEK 293-H细胞 SUDHL2细胞系相关产品:L-M (TK-)细胞、SV-HUC细胞、NCTC929细胞 UCD-MLA-144细胞系相关产品:SW-900细胞、L132细胞、SK MEL 5细胞 H-2405细胞系相关产品:Lu-99A细胞、WiDr细胞、WM115F细胞 RFL 6细胞系相关产品:BT 325细胞、HEC1-A细胞、SUM52细胞 SKMEL-24细胞系相关产品:MDA-134细胞、AE 1201细胞、MV4II细胞 Epstein-Barr-3细胞系相关产品:SHG44细胞、Roswell Park Memorial Institute 2650细胞、NEC-8细胞 SK BR 03细胞系相关产品:3T3NIH细胞、KTC1细胞、Hs 739.T细胞 SKNEP-1细胞系相关产品:HuLEC-5a细胞、KM-12细胞、786-O细胞 SUM52PE细胞系相关产品:AtT-20细胞、451Lu细胞、JM1细胞 R D细胞系相关产品:CAL 120细胞、MDA-MB-175VII细胞、SUM 149细胞 NCIH446细胞系相关产品:Medical University of Graz-Chordoma 1细胞、Ketr3细胞、HRA 19细胞 SUIT-2细胞系相关产品:K1735细胞、GalK 1细胞、HLCL9B10细胞 RPMI6666细胞系相关产品:CCRF/CEM-C7细胞、MPP89细胞、DH 82细胞 639-V细胞系相关产品:PA-TU-8988S细胞、CAL27细胞、NCI-H1435细胞 KP-N-RT-BM-1细胞系相关产品:OCIAML3细胞、KAT5细胞、578T细胞 Me Wo细胞系相关产品:MDAMB453细胞、SUM 159PT细胞、SW 1417细胞 Neukoplast细胞系相关产品:HKF细胞、Laboratory of Allergic Diseases 2细胞、TOV21G细胞 HEK 293-EBNA细胞系相关产品:HIT clone T15细胞、NCIH211细胞、SUM-52-PE细胞 LICR-HN-6细胞系相关产品:MB468细胞、38C-13细胞、Roswell Park Memorial Institute 6666细胞 MFD-1细胞系相关产品:LAPC-4细胞、JHH-7细胞、MC3T3-E1 Subclone 24细胞 MOLT-4细胞系相关产品:HEL92.1.7细胞、RGC-5细胞、SNU668细胞 SU4细胞系相关产品:NW38细胞、MCA-38细胞、CAL-39细胞 Hs 737.T细胞系相关产品:293 F细胞、BT细胞、Merwin Plasma Cell tumor-11细胞 CoCL3细胞系相关产品:H1355细胞、H2228细胞、T-ALL1细胞 HEK 293FT细胞系相关产品:CBRH7919细胞、HBE细胞、IAR 20细胞 SK-SH-SY5Y细胞系相关产品:QGY-7701细胞、SKO007细胞、RS4;11细胞 OCI-AML4细胞系相关产品:HCC-94细胞、F36P细胞、Colo320细胞 VK2/E6E7细胞系相关产品:ESC细胞、H660细胞、C17细胞 OP-9细胞系相关产品:MADB-106细胞、RERF-LCMS细胞、Y3-Ag1.2.3细胞 NCI-H1672 epithelioid cells人小细胞肺癌细胞系 MPC5细胞系相关产品:COLO-HSR细胞、CCRF.CEM细胞、H-2052细胞 NCIH1437细胞系相关产品:H1385细胞、H735细胞、HCC1438细胞 1E8-H细胞系相关产品:RPMI 7666细胞、SKNMC细胞、NTC-200细胞 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