"Karpas-299 Lymphoblastoid cells人间变性大细胞淋巴瘤细胞系 细胞背景资料:间变性大细胞淋巴瘤;男性 细胞形态:淋巴母细胞样 细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。 CHP 212细胞系相关产品:HCC-1806细胞、H-1155细胞、KMS-11细胞 MDCK-2细胞系相关产品:Ku812F细胞、HS578T细胞、Swiss/3T3细胞 HO1N1细胞系相关产品:Case 3细胞、Clone M-3细胞、VMM5A细胞 细胞生长:悬浮 Karpas-299 Lymphoblastoid cells人间变性大细胞淋巴瘤细胞系 细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源 细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支) 为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱,要轻柔操作。冻存细胞要快速融化,并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感,离心去除冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml;培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。离心方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀;以大约80x离心2到3分钟;弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞,并且进行活细胞计数。细胞铺板,细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个,可以区分为200多种不同类型的细胞:形态结构,代谢,行为,功能等各不相同。追根溯源,这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以,通常把发育过程中,细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段,也发生在胎儿出生以后,乃至成人阶段。例如,人体血细胞的产生和分化,这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞,转入分化,通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞,它们的基因表达和代谢活动各不相同。 细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。 IAR 20细胞系相关产品:NG-108-15细胞、N9细胞、293 F细胞 RD 2细胞系相关产品:SACCLM细胞、PANC-10-05细胞、COLO-HSR细胞 A375mel细胞系相关产品:SKLMS-1细胞、SGC-7901细胞、JHH2细胞 H1836细胞系相关产品:H-1581细胞、MUGCHOR1细胞、GM00215A细胞 Hi5细胞系相关产品:JC细胞、SKCO1细胞、CEMx721.174.T2细胞 细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 Karpas-299 Lymphoblastoid cells人间变性大细胞淋巴瘤细胞系 细胞生长特性:悬浮 细胞形态特性:详见细胞说明书 细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。 1.1B4细胞系相关产品:LN-18细胞、GM637A细胞、Human Kidney-2细胞 QGP-1细胞系相关产品:BALB 3T3 clone A31细胞、HSC-1细胞、JB6 Cl 30细胞 AQ-Mel细胞系相关产品:SUM149PT细胞、NCI522细胞、Jurkat E6.1细胞 H1355细胞系相关产品:NBL-3细胞、SN-12C细胞、NCI-H250细胞 SNK1细胞系相关产品:H1882细胞、NCI-H847细胞、Human Hepatocyte Line 5细胞 SW-1116细胞系相关产品:CL1细胞、Transformed Human Liver Epithelial-3细胞、MODE-K细胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10细胞系相关产品:NHEK细胞、T-HEECs细胞、SV40-MES13细胞 H-2198细胞系相关产品:KMS-11细胞、NCCIT细胞、JJN-3细胞 K422细胞系相关产品:N2a细胞、DHL-8细胞、Chang Cells细胞 LYR细胞系相关产品:SU-DHL6细胞、XuanWei Lung Cancer-05细胞、HSC6细胞 Karpas-299 Lymphoblastoid cells人间变性大细胞淋巴瘤细胞系 Murine Leydig Tumor Cell line-1细胞系相关产品:GH3细胞、DrG细胞、Hs 819.T细胞 87MG细胞系相关产品:BJA-B-1细胞、SK-RC 42细胞、GA10细胞 NCI-H64细胞系相关产品:HepaRG细胞、D-324 Med细胞、McA-RH7777细胞 NCIH716细胞系相关产品:GM03573A细胞、3D4/21细胞、AMJ2C8细胞 WM239细胞系相关产品:GM03320D细胞、SNU-423细胞、TU 686细胞 JHH7细胞系相关产品:TE354.T细胞、GM03190细胞、WERI-Rb-1细胞 JHH7细胞系相关产品:TE354.T细胞、GM03190细胞、WERI-Rb-1细胞 Uhth-74细胞系相关产品:HOS (TE85, Clone F5)细胞、P30-OHK细胞、OSKM-1细胞 LS-411细胞系相关产品:H1693细胞、MC3T3-E1 Subclone 14细胞、OVCA433_Bast细胞 HT细胞系相关产品:WM35细胞、MIHA细胞、SNU1细胞 HCV-29细胞系相关产品:E.L.4细胞、NCI-H-295细胞、Hmy.2 CIR细胞 SCC25细胞系相关产品:Hs-940细胞、Intestinal Epithelioid Cell line No. 6细胞、P3-Jiyoye细胞 RA 1细胞系相关产品:NCTC 1469细胞、A549 ATCC细胞、A-704细胞 HEK/293细胞系相关产品:VMM5A细胞、Human Corneal Epithelial cells-Transformed细胞、L-M[TK-]细胞 SK LU 1细胞系相关产品:EMT6细胞、LA-N-6(OAN)细胞、NCIH1836细胞 BC-020细胞系相关产品:C-8161细胞、Vero E6细胞、B-16细胞 OCI-LY-1细胞系相关产品:Hs 445细胞、L6细胞、SMMC7721细胞 CAL-39细胞系相关产品:B16 subline B78细胞、EA.hy 926细胞、MC-3T3-E1细胞 NCI-SNU-423细胞系相关产品:CNE2细胞、JKT-1细胞、PMVEC细胞 HS 1.Tes细胞系相关产品:MCFs细胞、NCI-747细胞、NCI-H-69细胞 NOZC-1细胞系相关产品:F442A细胞、MFE-280细胞、Hs 636.T细胞 HuH-28细胞系相关产品:MCCAR细胞、Hs934T细胞、Jurkat, Clone E6-1细胞 NTERA2细胞系相关产品:NBL-4细胞、NK-92 MI细胞、SW 1353细胞 SKBr3细胞系相关产品:Hs-281-T细胞、HFTF细胞、OAW 42细胞 LU-65M细胞系相关产品:OE19细胞、LL/2细胞、NCIH1436细胞 C-28/I2细胞系相关产品:C-32细胞、L-5178-Y-R细胞、BNCL-2细胞 HeLa S3细胞系相关产品:NCI-H82细胞、H676B细胞、Mink细胞 NCI-H1666细胞系相关产品:Mouse Bladder Tumor line-2细胞、MDA-MB-435 S细胞、GM02131细胞 GM0637细胞系相关产品:SUM149细胞、TOV112D细胞、Leukemic 1210细胞 HEK293S细胞系相关产品:Michigan Cancer Foundation-12A细胞、SUM149PT细胞、LNCaP.FGC细胞 MV 4;11细胞系相关产品:KYSE 140细胞、CV-1.K细胞、RAW2647细胞 C-26细胞系相关产品:NCI-SNU-878细胞、NS-1-Ag4-1细胞、J-774A.1细胞 NCI-HUT-596细胞系相关产品:675T细胞、A 253细胞、CWR22Rv1细胞 NCl-H157细胞系相关产品:BC-027细胞、HITT15细胞、MDA-134细胞 COLO 205细胞系相关产品:H4-II-E细胞、SUM 102PT细胞、COLO_320DM细胞 Namalwa细胞系相关产品:A 253细胞、CV-1 in Origin Simian-7细胞、Mc Ardle 7777细胞 SNT8细胞系相关产品:CCD33Co细胞、OCI-LY-10细胞、HP615细胞 UPCI:SCC090细胞系相关产品:alpha-TC1.6细胞、HP615细胞、EFM-19细胞 Hs888T细胞系相关产品:C4 I细胞、LPC-H12细胞、GOS3细胞 HBL1细胞系相关产品:U2-OS细胞、VSMC细胞、D324细胞 IFRS1细胞系相关产品:SNU-423细胞、GM06141细胞、TE13细胞 NALM6细胞系相关产品:Ramos (RA)细胞、IPEC-J2细胞、CTV1细胞 EFM-192C细胞系相关产品:C-33A细胞、MDAPC2B细胞、293-H细胞 FRhK4细胞系相关产品:NCIH508细胞、CCLP-1细胞、Tn 5B1-4细胞 G361细胞系相关产品:EBNA-293细胞、H-1755细胞、Ly10细胞 U 266细胞系相关产品:SUDHL-4细胞、AML-EOL-1细胞、HCS-2/8细胞 TCam-2细胞系相关产品:SKMES-1细胞、NB-9细胞、HFF细胞 Mouse podocyte细胞系相关产品:PANC 813细胞、MEC-1细胞、L5178Y-R细胞 Hep G2-Luc细胞系相关产品:SUDHL-5细胞、A673细胞、Ls-174-T细胞 HO1N1细胞系相关产品:Case 3细胞、Clone M-3细胞、VMM5A细胞 NCI-N87细胞系相关产品:NRK细胞、NCI-H2196细胞、Fetal Bovine Heart Endothelial细胞 Karpas-299 Lymphoblastoid cells人间变性大细胞淋巴瘤细胞系 U 266细胞系相关产品:SUDHL-4细胞、AML-EOL-1细胞、HCS-2/8细胞 VM-CUB-1细胞系相关产品:BT-483细胞、22Rv-1细胞、HUCEC细胞 CATH.a细胞系相关产品:ECC 12细胞、H-2330细胞、Mo7e细胞 AQ-Mel细胞系相关产品:SUM149PT细胞、CZ-1细胞、HS-294-T细胞 "
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