U-937 Suspended人组织细胞淋巴瘤细胞系

"U-937 Suspended人组织细胞淋巴瘤细胞系
细胞背景资料：该细胞是由NilssonK实验室于１９７４年从一名３７岁的患有恶性组织细胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分离建立的。１９７９年来的研究显示该细胞在人混合淋巴细胞培养物上清、佛波酯、VitD３、γ-IFN、TNF和维A酸的诱导下可以向终末单核细胞分化。该细胞不合成免疫球蛋白，EBV阴性；可产生溶菌酶、β-２-微球蛋白，受PMA刺激后可产生TNF-α；表达C３R；可作转染宿主；表达Fas，对TNF和抗Fas的抗体敏感。
细胞形态：淋巴母细胞样
贴壁细胞传代：去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代：一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 室温离心5min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培养液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。
细胞生长：悬浮
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
U-937 Suspended人组织细胞淋巴瘤细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
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细胞传代方法：维持细胞浓度在１×１０５-２×１０６/ml；根据细胞浓度３-４换液１次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
HEP3B2细胞系相关产品：Hos TE-85细胞、H647细胞、HMSC细胞
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细胞生长特性：悬浮生长
U-937 Suspended人组织细胞淋巴瘤细胞系
细胞形态特性：单核细胞
动物细胞实验室必备仪器进行简单介绍：１)CO２培养箱：CO２培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O２浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO２培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要；２)烘箱(干燥箱)：用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到１６０℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至１００℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至１００℃以下后可开门。３)超净工作台/生物安全柜：细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在１００级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。４)液氮罐：为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-１９６℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。５)超低温冰箱：细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般４℃下存放３０min，转放-２０℃ １ hour，再转入-７０至-８０℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-１９６℃)，这时就必须配备一台-８６℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。６)恒温水浴：从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于３７℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。７离心机：细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的分离则需要高速冷冻离心机。除上述仪器外，移液器、高压灭菌锅、倒置显微镜、荧光显微镜也是细胞培养的必备仪器，发酵罐、转瓶机等也常常见于细胞培养实验室。
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