"FaDu Thawing人咽鳞癌细胞系
细胞背景资料:1968年从一位印度下咽骨肿瘤患者的钻孔活组织切片中建立了FaDu细胞株。在建立的细胞株中发现细胞质中含有成束的细丝,并且细胞分界上的桥粒特别突出。
细胞形态:上皮细胞样
FaDu Thawing人咽鳞癌细胞系
细胞生长:贴壁
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
悬浮细胞不容易转染:悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次,脂质体试剂的毒性较大,这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外,悬浮细胞不易培养,易死亡,也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率,可以使用非脂质体的转染试剂,如纳米材料的。也可以使用电转染方法,针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的,电击对细胞有一定的损伤,选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂,可以将电击对细胞的伤害降到最低,悬浮细胞不易转染,选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
FaDu Thawing人咽鳞癌细胞系
细胞生长特性:贴壁生长
很多朋友讨论细胞培养问题,见到很多很好的经验总结,这里说一些我个人的经验,因为一些比较特殊的原因,我自己培养接触过近300种细胞,常用于做实验的,累积有百余种,可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的篇专题,并不是因为细胞消化最重要,而是近期看到大家频繁讨论这个话题,我就抛砖引玉,下面几点拙见,可能与其它朋友总结的一些经验有点出入,仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究,得出了很多有价值的经验,也见到很多人的困惑。其实细胞培养,尤其是细胞系的培养,就消化而言,不是太难,做得多了,善于总结经验,就能把细胞越养越好。一般的程序步骤,细节操作,我这里就不讲了,只讲一些基本操作背后的知识,如果不对之处,欢迎指正,总结下来,细胞培养中消化很重要,但其实消化并不是细胞培养的关键所在(虽然很重要),关键所在是细胞来源,血清质量和水源(自己配制溶液的话)。我看到版上许多人养细胞遇到各种各样的问题,很多时候bottleneck没有找到,虽然通过其它方法有所改善,但仍然是事倍功半。因为人们往往注意自己的操作,总觉得自己没有经验,而忽视试剂,溶液尤其是细胞的质量,后者其实才是许多细胞培养实验室常见的问题。
细胞形态特性:上皮样
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FaDu Thawing人咽鳞癌细胞系
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