"PA317 Thawing逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
细胞背景资料：胚胎；成纤维细胞；NIH Swiss
细胞形态：上皮细胞样
PA317 Thawing逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
细胞生长：贴壁
为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，特别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞冻存复苏材料与方法步骤：常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有３５L和５０L两种。使用时要注意以下几点：(１)一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-１９６℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。(２)液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。(３)在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(１２１°C蒸气高压消毒)，２mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为：(１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为３×１０６～１×１０７/mL之间。(３)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装１～１.５mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(４)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入４℃冰箱中２～３小时，再移至冰箱冷冻室内３～４小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放２小时，最后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
PA317 Thawing逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
细胞生长特性：贴壁
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培养基；包含１０%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%甘油的新鲜培养基或５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：５０%细胞条件无血清培养基和５０%包含有７.５%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有７.５%二甲基亚砜和１０%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约２００～４００g离心５分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以１×１０(７)到５×１０(７)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约２００g离心５分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以５×１０(６)到１×１０(６)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
细胞形态特性：详见细胞说明书
LMTK-细胞系相关产品：ECV细胞、MUM2B细胞、MOLM-13细胞
Human Liver-7702细胞系相关产品：JiyoyeP-2003细胞、ATDC5细胞、LICR-HN-6细胞
NCIH716细胞系相关产品：GM03573A细胞、3D4/21细胞、AMJ2C8细胞
LL/2(LLc1)细胞系相关产品：CHL/IU细胞、MDA-MB-361细胞、SW 1463细胞
U373MG细胞系相关产品：TE85细胞、C127细胞、CHP126细胞
BHP 10-3细胞系相关产品：W133细胞、Jurkat clone A3细胞、RPMI 1788细胞
Walker256细胞系相关产品：NCI-H1993细胞、kms 11细胞、624mel细胞
H-748细胞系相关产品：Mel624细胞、MARC 145细胞、SK-RC 39细胞
MDA-MB-435 S细胞系相关产品：MDA231-LM2细胞、DHL6细胞、INS1E细胞
TE13细胞系相关产品：H1944细胞、GM05372细胞、CT26.CL25细胞
MC3T3-E1 Subclone 4细胞系相关产品：RCF细胞、H184A1细胞、CAL 148细胞
NCI-H1522细胞系相关产品：H441细胞、GM03671细胞、SK-HEP-1细胞
SUM-52PE细胞系相关产品：GM01232E细胞、LLC-PK1细胞、U-226AR1细胞
MHCC97-L细胞系相关产品：SKCO1细胞、SACC83细胞、NCI-H2126细胞
SHSY5Y细胞系相关产品：H1666细胞、BGC823细胞、CTV1细胞
AM细胞系相关产品：HFLS-RA细胞、KYSE520细胞、REC细胞
HCT15细胞系相关产品：P-3J细胞、HuT 102细胞、OVCAR 8细胞
MDAMB-231细胞系相关产品：KTCTL140细胞、SUM 149PT细胞、PC3-M细胞
MIA-PaCa-2细胞系相关产品：Dakiki细胞、HSC3细胞、HCPEpiC细胞
C-28I2细胞系相关产品：RPPVEC细胞、H-1650细胞、NCI-H1993细胞
HCC-2185细胞系相关产品：hTERT RPE-1细胞、SU-DHL-8细胞、KYSE140细胞
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NOZ细胞系相关产品：H196细胞、NCI-H-69细胞、THP-1细胞
MPP-89细胞系相关产品：Adeno-293细胞、COLO 738细胞、IBRS2细胞
E6-1细胞系相关产品：FRhK-4细胞、293 c18细胞、143 B细胞
MT4细胞系相关产品：B6Tert-1细胞、XWLC-05细胞、MRC-5细胞
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4T1-LUC细胞系相关产品：HEL-92.1.7细胞、BT-325细胞、H650细胞
Panc 02细胞系相关产品：T47-D细胞、Hs675T细胞、Pan02细胞
BE2_C细胞系相关产品：SJRH30细胞、HN4细胞、AE1201细胞
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2B4细胞系相关产品：MOPC细胞、PK 15细胞、KY180细胞
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SW480细胞系相关产品：HPAEpiC细胞、SK-LMS-1细胞、TK-1细胞
NCI-H2195细胞系相关产品：Menschliche Und Tierische Zellkulture-3细胞、HEK 293 EBNA细胞、VMCUB1细胞
BrCL12细胞系相关产品：LM2-4175细胞、HM06.A1细胞、EOL1细胞
M-1 myeloid leukemia细胞系相关产品：NCI H69细胞、H69/P细胞、RAT2细胞
UMR106细胞系相关产品：TGW-nu细胞、Panc203细胞、Mouse INsulinoma 6细胞
KRC-Y细胞系相关产品：Human Foreskin Fibroblast细胞、EAC细胞、Y3M细胞
HCAEC细胞系相关产品：NCIH522细胞、H.Ep.-2细胞、PLC细胞
HN 4细胞系相关产品：NTERA2细胞、EFM-192A细胞、NCI-H1915细胞
MC9细胞系相关产品：CCD1112Sk细胞、KYSE-180细胞、0V-1063细胞
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H-295细胞系相关产品：RDES-1细胞、LOU-NH91细胞、T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞
OCI-LY-18细胞系相关产品：ROS17/2.8细胞、MCA38细胞、HCC-9724细胞
NE-4C细胞系相关产品：PK-136细胞、rRMECs细胞、NuTu-19细胞
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L-M (TK-)细胞系相关产品：Sp2/0细胞、SKGT2细胞、SKG IIIa细胞
SK_N_BE2C细胞系相关产品：MSTO-211 H细胞、NCI-H865细胞、NCIH2126细胞
GM04680细胞系相关产品：PL11细胞、KYSE270细胞、WSU-HN13细胞
FRTL5细胞系相关产品：HPASMC细胞、HARA-B细胞、FDCP-1细胞
PC-9S1细胞系相关产品：TK 10细胞、MDA-MB436细胞、RMG-I细胞
H498细胞系相关产品：MES-23.5细胞、NCI-H676细胞、Mel-MeWo细胞
McA-RH7777细胞系相关产品：H-1373细胞、SUM-149细胞、SMC-1细胞
SNGM细胞系相关产品：H2009细胞、RT4-D6-P2T细胞、293-FT细胞
Hs888 Lu细胞系相关产品：NE-4C细胞、NTERA-2 cl.D1细胞、Ca9-22细胞
D283 Med细胞系相关产品：253JB-V细胞、L 428细胞、BC3H1细胞
SNU-484细胞系相关产品：T.T细胞、KTC-1细胞、EBNA293细胞
NCI-H1299细胞系相关产品：COR-L23细胞、Madison 109细胞、C643细胞
PK(15)细胞系相关产品：SW403细胞、T/G HA-VSMC细胞、BGC823细胞
PA317 Thawing逆转录病毒包被的NIH3T3细胞系
H-87细胞系相关产品：Panc813细胞、Karpas299细胞、ZR75-30细胞
Mono-Mac-1细胞系相关产品：ssMCF7细胞、ATC241细胞、Normal Rat Kidney细胞
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P 3 HR 1细胞系相关产品：SK-MEL-31细胞、Monomac-1细胞、NCI-HUT-460细胞
ZR-75-30细胞系相关产品：EBC-1/original细胞、SiHa细胞、EAC-E2G8细胞
SK Mel 1细胞系相关产品：OVCAR 5细胞、MUG-Chor1细胞、SW-579细胞
HIT T15细胞系相关产品：SuDHL 8细胞、DH82细胞、TCMK-1细胞
COR-L23细胞系相关产品：CF Pac1细胞、J774A1细胞、NFS 60细胞
COS7细胞系相关产品：BALB/3T3 cl. A31细胞、HR1K细胞、Vx2细胞
LC-1-sq细胞系相关产品：RH35细胞、P30OHK细胞、Panc_03_27细胞
HCC-1395细胞系相关产品：SCaBER细胞、MOLP8细胞、HO1-N1细胞
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