NKL Thawing人NK细胞淋巴瘤细胞系

"NKL Thawing人NK细胞淋巴瘤细胞系
细胞背景资料：NK细胞淋巴瘤/白血病；男性
细胞形态：淋巴母细胞样
NKL Thawing人NK细胞淋巴瘤细胞系
细胞生长：悬浮
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
NKL Thawing人NK细胞淋巴瘤细胞系
细胞生长特性：悬浮
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
细胞形态特性：详见细胞说明书
C4-2 Bone metastatic细胞系相关产品：H-82细胞、SW-527细胞、NBL-7细胞
HLE B-3细胞系相关产品：M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b细胞、Ly1细胞、CZ-1细胞
MUGCHOR1细胞系相关产品：no.11细胞、HCCC-9810细胞、WIL2S细胞
NBL-5细胞系相关产品：RPMI no. 8226细胞、PL-12细胞、32D clone 3细胞
MDA134细胞系相关产品：RBL 1细胞、H-1993细胞、MDCK细胞
HCC0202细胞系相关产品：B-CPAP细胞、HT-29/CX-1细胞、OV-1063细胞
K562细胞系相关产品：SUM52细胞、LWnt-3A细胞、EO771细胞
C26细胞系相关产品：LS123细胞、TNC-1B12B4细胞、H9c2细胞
A549ATCC细胞系相关产品：H-1435细胞、SJCRH30细胞、RGB细胞
NCIH1694细胞系相关产品：GC1-SPG细胞、S3-HeLa细胞、Hs 636 T细胞
UM-UC14细胞系相关产品：NCIH510细胞、OVCAR 8细胞、Psi2-DAP细胞
RL952细胞系相关产品：MV-4:11细胞、IA-LM细胞、Sf-21细胞
NTC-200细胞系相关产品：Panc-05.04细胞、MDAMB-231细胞、K7M2 wt细胞
Hs_578t细胞系相关产品：NOZC-1细胞、MILE SVEN 1细胞、NCIH1876细胞
RA-FLSs细胞系相关产品：HCC0044细胞、PLCPRF5细胞、MC57G细胞
TE6细胞系相关产品：MEF细胞、TE10细胞、DMS-273细胞
Z310细胞系相关产品：NCI660细胞、NCI-H2122细胞、TE354.T细胞
SUDHL-1细胞系相关产品：NCI-SNU-119细胞、JIMT-1细胞、COS1细胞
P31 FUJ细胞系相关产品：MDA-MB453细胞、PAMC82细胞、NT2/D1细胞
RBL-I细胞系相关产品：PFSK1细胞、B16细胞、Institute for Medical Research-32细胞
Anip-973细胞系相关产品：D 407细胞、HR-8348细胞、RKOE6细胞
HOEC细胞系相关产品：HT(H9)细胞、GDM1细胞、EA. hy 926细胞
DHL10细胞系相关产品：H1793细胞、TB-1 Lu细胞、32D CL3细胞
EOL1细胞系相关产品：H-2126细胞、NCI-SNU-475细胞、CMT.64细胞
Lung cancer-1/squamous细胞系相关产品：UM-UC-3细胞、QBC-939细胞、H220细胞
MB49细胞系相关产品：HOC细胞、SF-763细胞、Mhh-Call 2细胞
NKL Thawing人NK细胞淋巴瘤细胞系
MDA-MB-231细胞系相关产品：KYSE70细胞、MLA-144细胞、CTX TNA2细胞
32Dc3细胞系相关产品：L-M(TK-)细胞、BMSCs（mBMSCs）细胞、BE(2)M-17细胞
H-2196细胞系相关产品：HTori 3细胞、PANC3.27细胞、C1R细胞
LTEPa2细胞系相关产品：SNU-484细胞、PTK-1细胞、MADB106细胞
GA-10 clone 4细胞系相关产品：P388.D1细胞、Hs 636 T细胞、SNU-869细胞
Instituto Biologico-Rim Suino-2细胞系相关产品：SSP-25细胞、H6c7细胞、HANK细胞
SNU-719细胞系相关产品：HcerEpic细胞、P36细胞、Sp2/0-Ag14细胞
H2135细胞系相关产品：HCC-1143细胞、Pa14C细胞、OCI-Ly19细胞
KYSE 70细胞系相关产品：REC细胞、Pt-K1细胞、Kit225-K6细胞
GA10细胞系相关产品：H-322细胞、HCT116/L细胞、TK+/- (clone 3.7.2C)细胞
PK-15细胞系相关产品：PIGI细胞、SK Mel28细胞、GB1细胞
Roswell Park Memorial Institute 7951细胞系相关产品：NCI-ADR-RES细胞、SKN-AS细胞、A-375.S2细胞
SupT1细胞系相关产品：HB611细胞、HCC1171细胞、H4-IIE-C3细胞
KYSE-410细胞系相关产品：TE1细胞、SKMEL-1细胞、BTT739细胞
HOP-92细胞系相关产品：L-WRN细胞、SCC25细胞、LA-N-6细胞
COS1细胞系相关产品：Pa14C细胞、H-1373细胞、YT细胞
TF-1细胞系相关产品：Chang liver细胞、Alexander cells细胞、hTERT RPE1细胞
H-865细胞系相关产品：Huh-7.5细胞、A20细胞、SKES-1细胞
MAntle cell VERona-1细胞系相关产品：CORL88细胞、PASMCS细胞、Tu686细胞
Sarcoma OSteogenic-2细胞系相关产品：8305C_1细胞、MZ-CRC-1细胞、MC116细胞
GM02219D细胞系相关产品：RMa-bm细胞、WSU-DLCL2细胞、HFT8810细胞
201T细胞系相关产品：Fetal Bovine Heart Endothelial细胞、KALS-1细胞、MDBK (NBL-1)细胞
SK-MEL-2细胞系相关产品：SNU638细胞、Mouse Bladder Tumor line-2细胞、CCD 841 CoN细胞
H820细胞系相关产品：CHP-100细胞、PC 61细胞、IAR-20细胞
WiDr-TC细胞系相关产品：Los Angeles Prostate Cancer-4细胞、SUM-190PT细胞、WIL2 Secreting细胞
UMUC3细胞系相关产品：JJN3细胞、hTERT-RPE1细胞、Rat Lung-65细胞
PK13细胞系相关产品：MIA PaCa-2细胞、MM1S细胞、BEAS-2B细胞
SHG 44细胞系相关产品：HD-LM-2细胞、Hs840T细胞、RT4-D6P2T细胞
JURKAT E-6.1细胞系相关产品：MEL细胞、NCIH647细胞、Balb/c3T3细胞
U-2932细胞系相关产品：Hs 839.T细胞、P3HR1细胞、NRK52E细胞
L-132细胞系相关产品：CAL851细胞、EVSA/T细胞、OCI/AML5细胞
Hs870T细胞系相关产品：JG细胞、NCI-H748细胞、SK-MEL-1细胞
rRTEC细胞系相关产品：H596细胞、NCI-H1105细胞、MCF7ADR细胞
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HPAEpiC细胞系相关产品：Colon-38细胞、IMR-90细胞、hRPTC细胞
Mhh-Call 2细胞系相关产品：GP2-293细胞、RBVEC细胞、J 774A.1细胞
SCC-9细胞系相关产品：Ls-174-T细胞、TU 686细胞、A2780/CP70细胞
TE-6细胞系相关产品：SK MEL 28细胞、MFC细胞、REC-1细胞
HRA 19细胞系相关产品：Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative细胞、NCI-H2444细胞、L02细胞
SMA 560细胞系相关产品：HPAF-II细胞、H2444细胞、I90细胞
RT4细胞系相关产品：U-118-MG细胞、OLN 93细胞、SVOG细胞
G422细胞系相关产品：SKGT2细胞、B16F1细胞、H-2170细胞
N87细胞系相关产品：HDSMC细胞、Th17细胞、L-M(TK-)细胞
Hep 3B细胞系相关产品：Factor Dependent Continuous-Paterson 1细胞、SNGM细胞、HEK 293 c18细胞
KYSE0030细胞系相关产品：hOMF细胞、P31/Fujioka细胞、Human Epithelioma-2细胞
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